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DNA甲基化检测Methylation detection
发布时间:2019-12-13   点击次数:138次

技术服务介绍

DNA甲基化存在于大多数真核生物中,一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区,起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化,20%处于基因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序(Bisulfite Genomic Sequencing PCR)的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理,非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶,在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基,在反应完成时被保留,我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序,就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高,是甲基化检测的金标准。通过对疾病及正常对照样本的靶基因进行甲基化分析,在研究肿瘤发生机制及早期诊断等方面均具有重要的临床意义。

实验流程

 

 

Q:常见的甲基化测定方法有哪些,优缺点是什么?

常见方法

优缺点

MSP法(Methylation-specific PCR,MSP):重亚硫酸盐处理基因组DNA,分别设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果对甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。

无需挑克隆测序,步骤简单,但对引物设计的要求较高,容易出现PCR假阳性,影响实验结果分析。

BSP法(Bisulfite sequencing PCR ,BSP):重亚硫酸处理基因组DNA,设计BSP引物扩增,将PCR产物克隆至T载体测序,分析CpG位点是否发生甲基化。

可明确样本待测区段每个CG位点的甲基化程度;受实验方法和价格因素限制无法高通量。

高分辨率熔解曲线法(High Resolution Melting ,HRM):重亚硫酸处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,导致样品中的GC含量发生改变后溶解温度变化,从而进行分析。

检测方法高通量,但是无法明确每个CG位点的甲基化程度。

客户须知:

 

实物

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实验周期

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待测样本

待测序列信息

7周或以上

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