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免疫共沉淀生物技术服务
发布时间:2019-12-25   点击次数:135次

服务简介

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究两种蛋白质相互作用的有效方法。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合,也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档,已成为研究蛋白质相互作用的经典方法。

当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。

这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

 

免疫共沉淀服务价格与周期

服务项目

内容

价格

服务周期

免疫共沉淀

我们进行CO-IP和Western Blot检测

询价

3-4周

 

免疫共沉淀服务步骤

(1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C, 最大转速离心30 min后取上清;

(2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;

(3)取10μl protein A 琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗3 次,每次3,000 rpm离心3 min;

(4)将预处理过的10μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h,使抗体与protein A琼脂糖珠耦联;

(5)免疫沉淀反应后,在4°C 以3,000 rpm 速度离心3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS 上样缓冲液,沸水煮5分钟;

(6)SDS-PAGE, Western blotting或质谱仪分析。

客户提供

客户提供蛋白样品和沉淀用抗体;

新鲜的样本材料(组织、细胞或蛋白溶液);

用于western blot的一抗。

生物服务承诺
免疫共沉淀电子图片及分析结果;
相互作用蛋白鉴定结果,质谱鉴定结果和(或)western blot鉴定结果。

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