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SILAC-细胞差异蛋白质组分析服务
发布时间:2019-12-25   点击次数:228次

简介

SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)是基于哺乳动物细胞生长对“必需氨基酸”的依赖原理,将稳定同位素(13C、15N)标记的Lys(K)和Arg(R)加入细胞培养基中对细胞进行培养。在细胞的增殖过程中,稳定同位素标记的K和R自然“掺入”到蛋白质中,从而在细胞中所有的蛋白质上引入了质量标签(Mass Tag,3-10Da)。借助后续MS的高分辨率,在MS层面上,实现对蛋白质水平进行高精度定量的高端技术

SILAC技术基本的应用是做细胞/细胞亚组分(细胞质、细胞核、线粒体、外泌体等)的各种蛋白质表达差异谱分析此外,(1)使用SILAC技术标记小鼠、酵母、大肠杆菌、果蝇、线虫等模式生物,从而可以借助MS直接定量比较动物个体的蛋白质组差异(SILAM);(2)利用SILAC技术,借助细胞株,通用可以分析人体的不同组织的蛋白质表达谱差异(super-SILAC);(3)SILAC结合IP-MS(免疫沉淀-质谱)可定量分析蛋白质互作/翻译后修饰的定量分析(SILAC+IP-MS)。

SILAC技术的优势体现在(1)直接通过细胞代谢,实现对整个细胞蛋白质组的标记,从实验的源头引入质量标签(Mass tag),实验的系统误差显著降低;(2)实验步骤简单,只要将SILAC标记的和非标记的蛋白质1:1混合,就能进行后续MS分析;(3)定量准确度更高,定量信息丰富。

二、服务方案

(一)整体服务:

只需客户提供细胞即可,我方负责完成:

SILAC培养基制备。

细胞SILAC标记及标记效率MS检测;

SILAC标记细胞与非标记细胞扩增;

蛋白质提取、分离(SDS-PAGE)及染色;

切割条带,分别进行LC-MS测试;

MS数据分析,完成蛋白质的鉴定及定量分析,筛选差异表达蛋白;

差异表达蛋白常规生物信息学分析;

我方同样有技术实力进行具体蛋白质(经用SILAC实验筛选、验证后的蛋白)的功能实验。如有需求,方案另议。

(二)合作共赢方案:

原则是通过协商签订合同,双方各完成一部分实验内容。

客户方需从我方购买相应的SILAC培养基及耗材。我方提供细胞SILAC标记的实验方案,协助客户完成细胞的SILAC标记过程。

标记完成后,需用LC-MS鉴定细胞标记效率。该步骤需交由我方完成鉴定。

正式实验的蛋白质样品,需交由我方完成MS鉴定和定量分析。

三、其他特色:

SILAC培养基。我方能生产多种类型的SILAC培养基(K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等),7-10个工作日发货,免去客户从国外进口SILAC培养基及其标记氨基酸的漫长货期。

SILAC培养基,500ml起订。

我方同时销售SILAC相关的试剂/耗材(dialyzed FBS,filter等),欢迎咨询。

四、客户发表的代表性论文:

Analytical chemistry 2017, 89(19):10248-10255. 

Analytical chemistry 2017, 89(21):11468-11475.

Journal of proteome research 2013, 12(5):2055-2066.

Amino acids 2014, 46(4):841-852.

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