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SILAC+IP-MS-蛋白质互作定量分析整体服务
发布时间:2019-12-26   点击次数:251次

SILAC+IP-MS-蛋白质互作定量分析整体服务简介:

利用IP纯化蛋白质复合物时,除了能捕获到Target蛋白及其互作蛋白之外,细胞中一些与抗体/抗体偶联材料(agarose、magnetic beads等)高亲和的蛋白质也会被一起捕获下来(非特异性粘附蛋白),并且这些蛋白都是高丰度的。故而,在后续的LC-MS鉴定时,这些非特性的蛋白质会被高频率的检测到。这就带来了一个很困扰的问题:由于没有定量信息,在众多鉴定到的蛋白质中,如何才能排除非特性的粘附蛋白,找出真正的、与target特异性互作的蛋白。

将SILAC和IP技术相结合,借助SILAC引入质量差异,IP完成后,蛋白质复合物通过LC-MS分析,可同时完成定性(即鉴定,给出样品中有那些蛋白质)和定量(给出每个蛋白质被IP富集的相对程度)。根据定量结果结合软件统计分析,即可直接区分出那些是target特异性的相互作用蛋白(SILAC ratio>1.0),那些是非特异性的粘附蛋白(SILAC ratio=1.0)。从而快速筛选和锁定特异性的相互作用分子,后续生物学验证成功率明显提高。

技术和实验方案”高、大、上“,能显著提高文章的档次。

整体服务方案:

客户只需提供基因名称和细胞株即可,我方负责完成后续所有实验,包括:

基因克隆与慢病毒制备。

稳定细胞株构建与鉴定。

细胞SILAC标记及标记效率检测。

细胞扩增培养。

IP纯化蛋白质复合物并SDS-PAGE分离。

切割条带,LC-MS测试分析。

MS数据定性和定量分析,依据SILAC的定量值(SILAC ratio)筛选潜在的互作蛋白。

挑选潜在的候选验证蛋白(6个)进行后续验证。承诺6个验证蛋白,至少给出1个阳性的互作。

参考文献:

Nat Immunol 2014, 15(2):112-117.

Proc Natl Acad Sci U S A 2014, 111(51):18219-18224.

Science 2013, 340(6131):475-478.

Nat Cell Biol 2013, 15(6):625-636.

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