技术文章您的位置:网站首页 >技术文章 > ZETA LIFE高效率转染RAW264.7细胞成功案例
ZETA LIFE高效率转染RAW264.7细胞成功案例
发布时间:2020-09-27   点击次数:52次

品牌:ZETA LIFE

名称:advanced 转染试剂

规格:0.25ml;0.5ml;0.75ml;1.5ml

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)是通过Abelson鼠白血病病毒诱导BALB/c小鼠产生肿瘤后得到的细胞株。其在医学研究中应用十分普遍,是许多白血病相关研究模型的常用细胞株,在微生物学、免疫学等研究中也十分常用。但RAW264.7细胞形态和分化状态多变,在实际培养中较难把握,给科研工作带来了一定困难;且RAW264.7细胞很难转染,许多研究者表示Lipofectamine 2000根本转不进去,或者仅有不到10%的转染效率。因此RAW264.7细胞的培养及转染方法就很值得去探讨,本文就这些方面进行介绍,以供科研工作者借鉴。

RAW264.7细胞的形态特征

很多人养RAW264.7细胞时发现自己的细胞出现伪足;就连ATCC的描述也称RAW264.7细胞形态多样,可有圆形、类圆形,以及长出伪足的长梭形、多边形,可单核可多核。而实际,有伪足的情况是RAW264.7细胞受到外界刺激进行了分化,是细胞衰老、分化的表现;RAW264.7细胞的“较佳”形态应是较小的单核圆形细胞。

RAW264.7细胞的培养条件

RAW264.7细胞的培养环境与一般贴壁细胞并无差异。即培养箱温度为37℃,CO2浓度为5%。ATCC推荐的培养基为DMEM+10%的胎牛血清;实际上,经研究者们实验发现高糖型DMEM培养的RAW264.7细胞传代后贴壁更快、细胞生长速度更快。因此,推荐使用高糖型DMEM,FBS浓度为10%,作为RAW264.7细胞的培养基。

RAW264.7细胞的传代

关于RAW264.7细胞的传代方法,ATCC推荐使用细胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用弯嘴吸管吹打等方法。采用细胞刮刀进行传代时,细胞能较大限度被收集起来,但会对细胞造成机械性损伤、影响细胞形态及贴壁时间等。采用胰酶消化时,由于RAW264.7细胞贴壁较牢,消化时间就较长。但消化时间点不易把握,易消化过度,对细胞生长造成抑制。

因此,推荐使用弯嘴吸管吹打进行传代。具体做法是,当细胞达到传代密度时,先弃去培养基,用预冷的PBS洗涤两次,用弯嘴吸管吸取培养基,均匀、稍用力吹打瓶底,即可将细胞吹打下来(吹不下来的就不要了),离心后重悬即可分瓶培养。2 h后可见细胞贴壁。

由于RAW264.7细胞生长速度较快,一般1-2d换液1次,密度长至60%-70%左右即可传代,传代比例可为1:3-1:6。若传代间隔太久,细胞生长密度过大,细胞也容易发生分化,出现长伪足的多形细胞。

RAW264.7细胞的冻存及复苏

RAW264.7细胞的冻存及复苏方法与一般贴壁细胞并无较大差别。但由于RAW264.7细胞对外界刺激较敏感,对营养条件要求较高,许多人建议降低DMSO的浓度,增加FBS血清的浓度。因此冻存液的推荐配方为5% DMSO和20% FBS的培养基(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞的培养及其在诱导破骨细胞中的应用,许丹等,中国骨质疏松杂志,2016, 10, 22, 10)。

 RAW264.7细胞的转染

转染成功案例详见下图:

河北医科大学科研者提供

使用Zeta Life 转染试剂48小时荧光图片

©2020  上海创凌生物科技有限公司 All Rights Reserved.  网站地图    管理登陆  技术支持:化工仪器网
在线客服 二维码

扫一扫,关注我们