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原代破骨细胞前体细胞转染操作步骤在已经发表文章中的经验分享
发布时间:2021-07-22   点击次数:136次

原代破骨细胞前体细胞转染操作步骤在已经发表文章中的经验分享介绍


西部战区总医院药学部,在2021年发表文章到Cell Communication and Signaling的学术期刊中科研者使用美国invigentech转染试剂,高效率转染原代破骨细胞前体细胞(Osteoclast precursor cells),具体转染原代破骨细胞前体细胞方法经验如下:(注意:本文转染实验中使用的细胞数量、试剂用量和操作方法不适用于传统lipo3000转染试剂或类似产品)。

Cell culture

Sorted primary CD115(+) precursors were cultured in α-minimal essential medium (MEM) containing 10% FBS,1% penicillin-streptomycin solution and 50 ng ml1 colony stimulating factor (M-CSF, Abcam). After 3 days,the medium was replaced with fresh medium. LA was added at a concentration of 100 μg/ml to stimulate the precursors. To inhibit the expression of Cadherin-11, the primary osteoclast precursors were transfected with Cadherin-11 siRNA using INVI DNA RNA Transfection reagent (Invigentech) for 24 h. The sequence of Cadherin-11 siRNA was CCAATGGACCAAGATTTAT. In some experiments, primary cells were treated with BYL719 (2.5 μM), GSK690693 (25 nM), 66615 (50 nM), rapamycin (20 μM), or AMG-487 (30 μM).

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Invigentech.英克: 简介

美国 Invigentech(英克)公司是开发用于细胞培养的胎牛血清、细胞活力检测、细胞筛选、细胞支原体清除、细胞转染和组织再生的新型血清替代品;提供inviCELL™Platelet lysate无动物血清产品用于支持广泛的细胞扩增和生产,包括培养间充质干细胞和多种免疫细胞系等,为制药公司或者生物技术公司提供无血清细胞培养规模生产服务;INVI DNA  RNA Transfection Reagent为原代细胞、悬浮细胞、小动物活体转染提供高品质转染试剂;此外我们引进的新设施可生产高纯度注射用水和生物处理解决方案,用于满足任何细胞、科研和企业客户需求,每个批次胎牛血清、细胞活力检测、细胞筛选细胞,转染等产品质量的稳定性,以加速安全有效的基于细胞和组织的治疗研究、开发和商业化。



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