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透射电镜观察细胞样品实验检测服务
发布时间:2021-11-16   点击次数:54次

一、 透射电镜观察细胞样品实验检测服务实验仪器与试剂

表格一:实验仪器

仪器

透射电子显微镜

超薄切片机

 

表格二:试剂

试剂

PBSpH7.4

无水乙醇

丙酮

1%锇酸

Pon812包埋套装

酸双氧铀

醋酸铅

 

二、 实验步骤

1.  醛类固定:加入1mL 2.5%戊二醛溶液(PBS 稀释),4度固定过夜;

2.清洗:用PBS清洗4次,每次静置15min

3.锇酸固定:用1%锇酸溶液 4度固定2h

4.清洗:用PBS清洗4次,每次静置15 min

5.脱水:用50%70%80%90%乙醇梯度脱水各静置15min(70%乙醇中静置过夜),再用100%乙醇脱水2次,每次静置20min

6.置换:用丙酮置换2次,每次静置15min

7.  浸渍:过程如下:

A.丙酮:包埋剂=21(体积比)的浸渍液中浸渍1h

B.丙酮:包埋剂=12(体积比)的浸渍液中浸渍4h

C.纯包埋剂浸渍2, 每次24h

8. 包埋:将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中;

10.聚合:将包埋板置于65℃条件下各聚合48h以上;
11.修块:将包埋头修成梯形,且样品表面积小于0.2mm×0.2mm

12.超薄切片:切片厚度70nm

13.染色:醋酸双氧铀染色 10min后清洗;

          醋酸铅染色 10min后清洗;

14. 上机检测。

 


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