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让我们一起来学习一下293无血清培养基的使用方法
发布时间:2021-12-20   点击次数:22次
  293无血清培养基使用方法介绍:
  细胞驯化
  1)直接驯化
  大部分情况下,培养于其他培养基中的细胞,可以直接适应Balance CD 293 medium,只要按照日常传代方式(稀释)更换培养基即可。
  2)渐进式驯化
  注意:选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化
  ①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定,当细胞密度达到2x10 6 cells/ml后进行传代,传代细胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL,5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25;
  ②将细胞置于37℃,5% CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养;
  ③当细胞密度3-4天后达到3x10 6 cells/ml且细胞活率>90%,传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50,细胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如细胞生长慢,可离心上清,留20%条件培养基,加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基,继续培养;
  ④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90)直到100%的Balance CD 293培养基;
  ⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养,传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×10 6 cells/mL,细胞活率大于90%,这说明细胞已经完全适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时,细胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL,一般传代2-3次后再进行转染实验。
  注意: 一般细胞驯化过程中,前三代细胞的状态可能不是很好,但一般从第四代开始状态会有改善。
  细胞传代
  1)取细胞培养样品,人工或仪器测定细胞密度以及活率;
  2)计算传代所需的细胞用量,建议起始细胞密度为0.2-0.4×10 6 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL(100 mL的培养瓶)或50-60 mL(250 mL 的培养瓶);
  3)将细胞置于37℃,5%CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养,3-4天传代一次。
  细胞转染在Balance CD 293培养基中,采用商业化转染试剂(例如 Gibco 293Fectin?ExpiFectamine? 293 Transfection Kit )或 PEI 可以实现对 HEK293 细胞的高效转染。
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