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EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒(一步法)
发布时间:2021-12-28   点击次数:49次

EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒(步法) 不需提取细胞RNA,经过30分钟简单处理后,直接进行RT-PCR扩增。可用于细胞基因的克隆、基因表达定量、RNA病毒基因的扩增、RNA病毒PCR诊断、RNA病毒Real-time PCR诊断等。

产品资料

产品名称:EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒(步法)

英文名称:EZ Cell and Tissue RNA Direct PCR Kit(One Step)

产品规格:30T/100T

试剂盒应用:细胞组织或细胞基因的扩增与克隆、RNA病毒基因的扩增、RNA病毒PCR诊断、RNA病毒Real-time PCR.。

试剂盒组成:RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4、RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O

保存条件:-20ºC保存。使用将RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室温或37ºC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4和RT-Enzyme使用时需置于冰上。

使用方法:

细胞中RNA的扩增

(1)将6ul RNA-EZ-1与3ul RNA-EZ-2充分融合。

(2)取20ul细胞悬液(10^5-10^6cells/ml),加入上述混合液,混匀。

(3)置于37ºC静置10分钟。

(4)加入1ul RNA-EZ-3,混匀。

(5)置于37ºC静置15分钟。

(6)置于98ºC加热5分钟。

(7)加入60ul的RNA-EZ-4,混匀。

(8)取2ul(7)中处理液进行RT-PCR扩增。

组织块中RNA的扩增

(1)用 H2O 将 RNA-EZ-1 稀释 5 倍,每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀释液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2,混合均匀。同时处理多个组织块时,可以按照以上比例配制预混液并分装到每个离心管 26 µL。

(2)切取半颗米粒大小的组织块(< 3 mm3),完全浸入上述混合液中。

(3)置于 37ºC 静置 10 分钟。

(4)加入 1µL RNA-EZ-3,混匀。

(5)置于 37ºC 静置 15 分钟。

(6)置于 98ºC 加热 5 分钟。

(7)加入 60 μL RNA-EZ-4,混匀。

(8)取 2 μL(7)中处理液进行 RT-PCR 扩增。

Real-Time PCR

取上述细胞或组织处理液,加入特异性引物和 TaqMan 探针,可进行特异性靶标 RNA 的绝对定

量检测。如需进行 SYBR Green Real-time PCR,请选择 EZ021-01/-02(EZ® Cell and Tissue RNA Direct

PCR Kit(One Step))。

注意事项

(1)取样的细胞量应当适中,浓度不宜过高或过低,处理后溶液应当以透明为宜。

(2) 样品处理过程中应当防止交叉污染,推荐设置阴性对照参与处理过程,以检测环境的污染。

(3)用本产品扩增的 RNA 不宜太长,1000bp 及以内的片段佳,期研究中可扩增长达 1800bp的片段,扩增片段越长效率越低。扩增的成功率也与 RNA 的丰度、二结构以及引物等有关。

(4)本产品同样适用于相应的细胞或组织中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 诊断。

(5)2×RT-Buffer 中加入了染料和相应试剂,可直接进行电泳,无需另加 Loading buffer。

(6)处理 96 孔板中的细胞时,可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制预混液,使用多道移液器直接加入 96 孔板经 DPBS 洗涤的细胞中,实现高通量操作。

(7)2×RT-Buffer 中的染料不影响 TaqMan 探针的效果。

某疱疹病毒的Taqman探针法定量检测。将病毒进行连续10倍稀释,用EZ010试剂盒处理后,加入特异性Taqman探针,进行qPCR扩增,检测曲线呈现明显的梯度关系,样品间重复性良好,Ct值线性模拟R2=0.9978

某疱疹病毒的Taqman探针法定量检测。将病毒进行连续10倍稀释,用EZ010试剂盒处理后,加入特异性Taqman探针,进行qPCR扩增,检测曲线呈现明显的梯度关系,样品间重复性良好,Ct值线性模拟R2=0.9978


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