EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒（步法） 不需提取细胞RNA，经过30分钟简单处理后，直接进行RT-PCR扩增。可用于细胞基因的克隆、基因表达定量、RNA病毒基因的扩增、RNA病毒PCR诊断、RNA病毒Real-time PCR诊断等。

产品资料

产品名称：EZ细胞及动物组织RNA直扩RT-PCR试剂盒（步法）

英文名称：EZ Cell and Tissue RNA Direct PCR Kit（One Step)

产品规格：30T/100T

试剂盒应用：细胞组织或细胞基因的扩增与克隆、RNA病毒基因的扩增、RNA病毒PCR诊断、RNA病毒Real-time PCR.。

试剂盒组成：RNA-EZ-1、RNA-EZ-2、RNA-EZ-3、RNA-EZ-4、RT-Enzyme、2*RT-Buffer、ddH2O

保存条件：-20ºC保存。使用将RNA-EZ-1、RNA-EZ-4在室温或37ºC充分溶解。RNA-EZ-3、RNA-EZ-4和RT-Enzyme使用时需置于冰上。

使用方法：

细胞中RNA的扩增

（1）将6ul RNA-EZ-1与3ul RNA-EZ-2充分融合。

（2）取20ul细胞悬液（10^5-10^6cells/ml）,加入上述混合液，混匀。

（3）置于37ºC静置10分钟。

（4）加入1ul RNA-EZ-3，混匀。

（5）置于37ºC静置15分钟。

（6）置于98ºC加热5分钟。

（7）加入60ul的RNA-EZ-4，混匀。

（8）取2ul（7）中处理液进行RT-PCR扩增。

组织块中RNA的扩增

（1）用 H2O 将 RNA-EZ-1 稀释 5 倍，每 25 μL 的 RNA-EZ-1 稀释液中加入 3 μL 的 RNA-EZ-2，混合均匀。同时处理多个组织块时，可以按照以上比例配制预混液并分装到每个离心管 26 µL。

（2）切取半颗米粒大小的组织块（< 3 mm3），*浸入上述混合液中。

（3）置于 37ºC 静置 10 分钟。

（4）加入 1µL RNA-EZ-3，混匀。

（5）置于 37ºC 静置 15 分钟。

（6）置于 98ºC 加热 5 分钟。

（7）加入 60 μL RNA-EZ-4，混匀。

（8）取 2 μL（7）中处理液进行 RT-PCR 扩增。

Real-Time PCR

取上述细胞或组织处理液，加入特异性引物和 TaqMan 探针，可进行特异性靶标 RNA 的绝对定

量检测。如需进行 SYBR Green Real-time PCR，请选择 EZ021-01/-02（EZ® Cell and Tissue RNA Direct

PCR Kit（One Step)）。

注意事项

（1）取样的细胞量应当适中，浓度不宜过高或过低，处理后溶液应当以透明为宜。

（2） 样品处理过程中应当防止交叉污染，推荐设置阴性对照参与处理过程，以检测环境的污染。

（3）用本产品扩增的 RNA 不宜太长，1000bp 及以内的片段佳，期研究中可扩增长达 1800bp的片段，扩增片段越长效率越低。扩增的成功率也与 RNA 的丰度、二结构以及引物等有关。

（4）本产品同样适用于相应的细胞或组织中 RNA 病毒的 PCR、Real-Time PCR 诊断。

（5）2×RT-Buffer 中加入了染料和相应试剂，可直接进行电泳，无需另加 Loading buffer。

（6）处理 96 孔板中的细胞时，可按照 ddH2O:RNA-EZ-1:RNA-EZ-2=20:5:3 的比例配制预混液，使用多道移液器直接加入 96 孔板经 DPBS 洗涤的细胞中，实现高通量操作。

（7）2×RT-Buffer 中的染料不影响 TaqMan 探针的效果。

某疱疹病毒的Taqman探针法定量检测。将病毒进行连续10倍稀释，用EZ010试剂盒处理后，加入特异性Taqman探针，进行qPCR扩增，检测曲线呈现明显的梯度关系，样品间重复性良好，Ct值线性模拟R2=0.9978

某疱疹病毒的Taqman探针法定量检测。将病毒进行连续10倍稀释，用EZ010试剂盒处理后，加入特异性Taqman探针，进行qPCR扩增，检测曲线呈现明显的梯度关系，样品间重复性良好，Ct值线性模拟R2=0.9978