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Biozellen系列3D类器官培养基质胶应用
发布时间:2022-01-18   点击次数:195次

3D类器官培养基质胶

一、产品优势

1、基质胶为植物源:

A.无人畜共患病的病原菌或毒素污染

B.氨基酸序列100%人源化

C.成本低且易规模化大量生产

D.3D培养结束后基质胶可以融化

2、可用作医疗生物原料:

A.高安全、低过敏

B.高活性、高纯度

C.最是适合人体研究

3、符合人体癌药筛检:

A.低成本且稳定

B.3D癌组织培养系统

C.可用于精准人体癌药筛检

4、满足生物原料需求:

A.自产关键原料

B.低成本

C.降低批次差异

D.人源化原料更精准

二、应用

• 3D 类器官培养。

• 适合用于 3D 类器官药物筛检平台

三、适用细胞种类

• 原代细胞

• 干细胞

四、试剂盒组分

五、使用步骤:

A、试剂制备

A 基质胶:将A 基质胶溶于 37℃水浴槽回温 10分钟, 确认完全融解.

C 缓冲溶液(1X)制备: 使用前将 10X C 缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如:无血清 DMEM、 opt-MEM) 制

备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .

D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.

B、Biozellen®3D 类器官培养基质胶的制备

全部步骤需要在无菌环境内操作,操作步骤如下:

1. 将 24孔培养板放置于冰上预冷。

2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 培养基均匀混合,并与 0.5毫升 37℃ A 胶按照

1:1 等比例均匀混合,最终细胞密度105~107cells/mL。

注:请选择适当的培养溶液与条件进行试验,贴壁细胞应在~80% 汇合度下培养。

3.取 20-40 微升步骤 2 含细胞的混合 A 胶溶液滴于 步骤 1 预冷的培养板上, 胶体将于 5 分钟内成胶。

注: 测试胶体是否成胶,可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。

4.待胶体成胶后,添加 1 毫升冰的1X C 缓冲溶液,并盖过步骤 3 的胶溶液,固定 15 分钟。

5.待 15分钟固定后,小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。

6将含有细胞的胶于 37°C 二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养,并观察细胞球体的形成,按正常培养基

更换频率进行更换操作。

C、溶胶与收集细胞球体准备程序

小心的将培养基吸取移除,并用 1X PBS 进行清洗。

小心的将 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的 D 缓冲溶液,盖过胶滴于室温反应 5 分钟。

温和的用 1毫升移液管吸取,直到胶滴完全溶解。

将含有细胞球体的溶液吸入 1.5 毫升离心管,用1000 rpm的转速离心 10分钟,移除上清液体并收集细胞

球体做分析。

D、收集单颗细胞准备程序

在分离单细胞前,先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作

1. 添加 trypsin-EDTA并与收集的细胞球体于 37°C 混合反应。

2. 用 1毫升移液管混合,直到细胞体完全分解。

3. 待细胞球体完全分解,加入 3 倍体积的 1X PBS,并用 1000 转的转速进行离心 10分钟,并移除上清

液体收集沉淀的单细胞做分析。

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