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Biozellen鼠尾胶原蛋白Ⅰ型溶液应用及程序
发布时间:2022-02-07   点击次数:101次

货号 B-P-00001

规格 10mg、20mg 、50mg、100mg

保存条件 4℃、2年

应用

Biozellen® Collagen I 是二维环境中表面薄涂层的理想选择; 它促进各种细胞类型的细胞粘附,例如肝细胞、成纤维细胞、脊髓神经节、肌肉细胞、雪旺氏细胞、上皮细胞; 涂层胶原蛋白 I 可用于研究肿瘤细胞的侵袭、迁移和巨噬细胞、单核细胞的趋化性。

胶原 I 3D 凝胶类似于动物细胞外基质 在 3D 体外配置中的培养,与2D培养不同的是3D培养可以提供仿生物微环境可以操纵凝胶强度来影响 3D 培养中的细胞迁移;允许您研究 ECM 的变化对细胞发育、趋化性、迁移和形态的影响。

注意

胶原蛋白产品在操作与制备过程中,需保持无菌环境。

建议胶原蛋白与其他配制溶液要预先进行预冷,操作过程中在冰上进行制备。

涂覆程序

注意:使用这些建议作为指导,以确定您的培养系统的最佳包被条件。

1. 如果需要,将所需体积的胶原蛋白溶液从瓶子中转移到稀释容器中。 使用无菌 0.01 N HCl 溶液进一步稀释至所需浓度。

2.温和摇动胶原混合物直至材料完全混匀。

3.将稀释的胶原材料添加到培养表面,确保整个表面都被覆盖。 (建议:5 μg/cm2)

4.室温孵育,盖上盖子,1小时。

5. 孵育后,吸出所有剩余材料,直至表面干燥。

6.用无菌培养基或1X PBS仔细冲洗涂层表面,避免刮伤表面。

7.涂层表面准备好即可使用; 可以在 2-8°C无菌条件下储存长达一周。

一般的 3-D 凝胶制备程序

注意:I 型胶原蛋白凝胶的特性取决于制备过程中的多种因素,例如温度、pH 值和胶原蛋白浓度。

1. 将无菌 10X PBS、无菌 1N NaOH、无菌 dH2O、Biozellen® Collagen I 和无菌试管置于冰上。

2.确定最终体积和最终胶原蛋白浓度。 (建议浓度:0.5 - 3mg/ml)

3.计算如下:

4.执行以下步骤:

(a) 在试管中加入 10X PBS。

(b) 在 10X PBS 中加入 1N NaOH 调节 pH 值。

(c) 将 dH2O 添加到 10X PBS/1N NaOH 中以匹配最终体积,混合复合物并置于冰中。

(d) 将 Biozellen®Collagen I 加入试管中,彻底混合无气泡并置于冰上直至准备使用。

5.凝胶,将溶液无菌转移到细胞培养装置中,放入37℃培养箱30 分钟。

含有培养基的 3-D 凝胶制备程序

对于使用培养基的 3D 凝胶系统进行细胞培养,建议使用以下方案。

1. 将无菌 10X 培养基、无菌 1N NaOH、Biozellen® Collagen I、无菌 1X 培养基(含或不含细胞)和无菌试管置于冰上。

2. 选择性添加,如果10X 培养基中的成分不包含 NaHCO3, 则应另外添加无菌的 NaHCO3 缓冲液(依据 10X 培养基操作步骤),并放在冰上。

3.确定最终体积和最终胶原蛋白浓度。 (建议浓度:0.5 - 3mg/ml)

4. 确定 3D 凝胶中的最终细胞浓度。 (建议:105 ~ 107 个细胞/毫升)

5.使用以下公式计算内容物的体积。

6.执行以下步骤:

(a) 将 10X 培养基加入管中。

(b) 在同一管中加入 1N NaOH。

(c) 如果不含 NaHCO3,则添加额外的缓冲液。

(d) 将计算过体积的Biozellen® Collagen I胶原蛋白加入试管中充分混合,不 要产生气泡,并将其放在冰上直至准备使用。 (注意: 请尽快使用含有胶原蛋白的混合物,因为从 5 分钟左右部分凝胶开始凝固。)

(e)将含有悬浮细胞的 1x 培养基添加至装有上述溶液的试管中,并置于冰上。

7.为了胶尽快凝固,请将装有上述溶液的试管转移到培养箱,并在 37℃, 5% CO2 的培养箱中放置 30 分钟。

计算公式:



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