一．RAW264.7细胞

细胞取材于Abelson小鼠白血病病毒诱发的肿瘤组织，是科研上尤为常用的炎症细胞模型之一。该细胞易于增殖，有高效DNA转染力，对RNA干扰敏感，常用作转染宿主细胞和复制小鼠诺如病毒。细胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原阴性。据报道，该细胞建系后已不分泌且检测不到病毒颗粒，XC斑点形成实验阴性。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞，LPS或PPD处理2天后可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。

二、产品说明

1、产品名称

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包装规格

货号：AD600150

规格：1.5ml

3、储存条件

常温运输，4℃保存，可保存两年，拒绝反复冻融。

三、产品应用

各种细胞类型中最高的转染效率。

可用于多种真核细胞系的DNA转染、siRNA转染和共转染；

可用于各种原代细胞的DNA转染、siRNA转染；

可转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞，如:T细胞、NK细胞、人淋巴细胞、THP-1等；

可高效率转染siRNA到任何哺乳动物细胞。

四、使用说明

1、材料准备

RNA 浓度 20 uM /L

质粒 DNA 浓度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素 ）

2、操作步骤

提前 1 天接种细胞：细胞汇合度在 60-80%左右，再进行转染。

核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混匀，室温静 止 10-15 分钟。

在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基 里面可以含有血清。

细胞换液：转染 24 小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。

分析结果：质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率，48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若 进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率，48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。