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技术服务-蛋白互作-免疫共沉淀(Co-IP)实验原理介绍
发布时间:2022-09-08   点击次数:63次

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP):


蛋白质是细胞活性和功能的执行者,且蛋白质是依靠蛋白间相互作用执行功能的,因而研究蛋白的相互作用对于研究细胞活性和功能、解释生命过程和现象具有重要意义。

实验原理

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白间相互作用的经典方法,属于免疫沉淀技术的一类,常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。免疫共沉淀的设计理念是,假设一种已知蛋白是某个大的蛋白复合物的组成成员,那么利用这种蛋白的特异性抗体,就可能将整个蛋白复合物从溶液中“拉"下来(常说的“pull-down"),进而可以用于鉴定这个蛋白复合物中的其他未知成员。免疫共沉淀的特点可以概括为两点,是天然状态,第二是蛋白复合物。

实验方法

1. 预清洗beads。

2. 取蛋白样品分成input,igG组和目标抗体组进行IP。

3. 取出预清洗的beads. 加入 IP用的目标抗体和igG在rotator进行IP反应过夜。

4. IP过夜后收取蛋白

5. 通过SDS-PAGE和Western Blot或质谱进行检测。

结果展示

实验周期及交付标准

1. 实验周期:3-5周

2. 交付标准:完整实验报告(试剂、耗材、实验步骤)、原始数据等

需确认信息

1. 目的蛋白及信息

2. 样本种属及类型

3.是否提供一抗



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