一、3D基质胶细胞系细胞培养套装(不含酚红)产品说明
1、货号:B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10
2、规格:2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
3、储存条件:常温运输,4℃保存,可保存两年
二、3D基质胶细胞系细胞培养套装(不含酚红)产品特点
1、*植物源材料,无任何动物成分;
2、胺基酸序列*人源化 ;
3、可调控基质胶硬度进行多种细胞培养;
4、3D细胞/类器官培养种类数量范围更广;
5、无人畜共通病原菌或毒素风险;
6、适用于医疗级生物原料;
7、高活性、高纯度、可融化;
8、4度运输、4度保存;
9、2年保存时间;
10、3D培养结束后基质胶可以温和融化,并保留3D细胞/类器官结构完整性。
三、应用
•三维细胞球体培养试验
•适合用于三维细胞药物筛检平台
四、样本类型
•肿瘤细胞系
五、试剂盒组分
六、使用步骤:
A.试剂制备
A基质胶:将A基质胶溶于37℃水浴槽回温10分钟, 确认融解.
C缓冲溶液(1X)制备:使用前将10X C缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如: 无血清DMEM、opt-MEM) 制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .
D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.
B.Biozellen®3D细胞培养基质胶的制备
全部步骤需要在无菌环境内操作,操作步骤如下:
1. 将24孔培养板放置于冰上预冷。
2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 培养基均匀混合,并与0.5毫升37℃ A胶按照 1:1 等比例均匀混合,最终细胞密度105~107cells/mL。
注:请选择适当的培养溶液与条件进行试验,贴壁细胞应在~80% 汇合度下培养。
3.取 20-40 微升步骤 2 含细胞的混合 A 胶溶液滴于 步骤 1 预冷的培养板上,胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶,可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。
4.待胶体成胶后,添加1毫升冰的1X C缓冲溶液,并盖过步骤3 的胶溶液,固定 15 分钟。
5.待15分钟固定后,小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。
6将含有细胞的胶于37°C 二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养,并观察细胞球体的形成,按正常培养基更换频率进行更换操作。
C、溶胶与收集细胞球体准备程序
小心的将培养基吸取移除,并用1X PBS进行清洗。
小心的将 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的D缓冲溶液,盖过胶滴于室温反应 5分钟。
温和的用1毫升移液管吸取,直到胶滴溶解。
将含有细胞球体的溶液吸入1.5 毫升离心管,用1000 rpm的转速离心10分钟,移除上清液体并收集细胞球体做分析。
D、收集单颗细胞准备程序
在分离单细胞前,先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作
1. 添加trypsin-EDTA并与收集的细胞球体于37°C混合反应。
2. 用1毫升移液管混合,直到细胞体分解。
3. 待细胞球体分解,加入3倍体积的1X PBS,并用1000转的转速进行离心10分钟,并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。