细胞分离3D基质胶套装(不含酚红)包含全套胶体试剂与溶解试剂,可进行3D类器官培养与微环境等相关实验应用; 本试剂盒操作便利且可调控胶体硬度进行多种类器官培养测试;高分子胶体可快速形成水凝胶, 建议操作此培养胶体前详读此使用指南。(3D类器官培养基质胶材料为植物来源,无动物成分)
细胞分离3D基质胶套装(不含酚红)产品说明
1、货号:B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10
2、规格:2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
3、储存条件:干冰运输,-20℃保存,可保存一年。
一、产品描述
Biozellen®3D类器官培养基质胶套装包含全套胶体试剂与溶解试剂,可进行3D类器官培养与微环境等相关实验应用; 本试剂盒操作便利且可调控胶体硬度进行多种类器官培养测试;高分子胶体可快速形成水凝胶, 建议操作此培养胶体前详读此使用指南。
(Biozellen®3D类器官培养基质胶材料为植物来源,无动物成分)
二、应用
• 3D类器官培养。
• 适合用于3D类器官药物筛检平台
三、适用细胞种类
• 原代细胞
• 干细胞
四、细胞分离3D基质胶套装(不含酚红)试剂盒组分
B-P-00003-2、B-P-00003-4、B-P-00003-10
(对应数量和内容)
货号.
Components
Amount
Content
B-P-00003-A
A 基质胶 (2X)
4、8、20
0.5mL / tube
B-P-00003-C
C 缓冲溶液 (10X)
1、2、1
1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT
B-P-00003-D
D 缓冲溶液 (10X)
1、2、1
1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT
五、使用步骤:
A.试剂制备
A基质胶:将A基质胶溶于37℃水浴槽回温10分钟, 确认融解.
C缓冲溶液(1X)制备:使用前将10X C缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如: 无血清DMEM、opt-MEM) 制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .
D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.
B.Biozellen®3D类器官培养基质胶的制备
全部步骤需要在无菌环境内操作,操作步骤如下:
1. 将24孔培养板放置于冰上预冷。
2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 培养基均匀混合,并与0.5毫升37℃ A胶按照 1:1 等比例均匀混合,最终细胞密度105~107cells/mL。
注:请选择适当的培养溶液与条件进行试验,贴壁细胞应在~80% 汇合度下培养。
3.取 20-40 微升步骤 2 含细胞的混合 A 胶溶液滴于 步骤 1 预冷的培养板上,胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶,可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。
4.待胶体成胶后,添加1毫升冰的1X C缓冲溶液,并盖过步骤3 的胶溶液,固定 15 分钟。
5.待15分钟固定后,小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。
6将含有细胞的胶于37°C 二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养,并观察细胞球体的形成,按正常培养基更换频率进行更换操作。
C、溶胶与收集细胞球体准备程序
小心的将培养基吸取移除,并用1X PBS进行清洗。
小心的将 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的D缓冲溶液,盖过胶滴于室温反应 5分钟。
温和的用1毫升移液管吸取,直到胶滴溶解。
将含有细胞球体的溶液吸入1.5 毫升离心管,用1000 rpm的转速离心10分钟,移除上清液体并收集细胞球体做分析。
D、收集单颗细胞准备程序
在分离单细胞前,先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作
1. 添加trypsin-EDTA并与收集的细胞球体于37°C混合反应。
2. 用1毫升移液管混合,直到细胞分解。
3. 待细胞球体分解,加入3倍体积的1X PBS,并用1000转的转速进行离心10分钟,并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。