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NuSmart细胞和组织PCR试剂盒Plus免核酸提取产品更新
更新时间:2023-02-22   点击次数:385次

Nu-C01


试剂盒应用

本试剂盒可用于动物组织或细胞DNA 的克隆、重组细胞株鉴定、DNA 病毒鉴定、STR 鉴定等。依托NuSmart®平台升级TC-DNA Lysis 配方,10 分钟内裂解各种细胞和组织。使用过程中无需大量样本、无需反复离心,从而获得高质量的DNA 模板。该试剂盒可以对单个细胞或10 个病毒粒子进行检测。

本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

保存条件

-20ºC 保存。

TC-DNA Lysis 和2×TaqMix(With Dye)长期使用可4℃保存,避免反复冻融。

需要准备

金属恒温浴、离心机、PCR 仪

使用方法

一、不同样品的处理方法

1. 组织液的处理

(1)组织液包括组织研磨液、细胞悬液、全血、血清、拭子处理液等。取10 μL组织液※置于离心管中。

※:棉签放入500μL生理盐水或无菌水中,浸泡5-10min,用力挤压后取10 μL置于离心管中。

(2)加入20 μL TC-DNA Lysis。

(3)充分混匀。

(4)置于55℃作用5 分钟。溶液即为DNA 模板。

2. 组织块的处理

(1)用眼科剪剪取1-2mm 的组织块,并将组织块剪成肉泥状。

(2)加入20 μL TC-DNA Lysis。

(3)充分混匀。

(4)置于55℃作用5 分钟。

(5)10,000rpm 离心60 秒取上清。上清即为DNA 模板。

二、推荐PCR 反应体系

三、按照以下方法设定PCR 反应

注意事项

一、试剂盒使用前注意事项

(1)所有试剂应按照温度储存。请勿反复冻融。

(2)使用前需要对操作区进行消毒,消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除剂等。耗材均使用商品化的无酶耗材。

(3)TC-DNA Lysis 采用配方,若出现肉眼可见小球状物质属于正常现象。

(4)TC-DNA Lysis 频繁使用,可在4℃保存。长期不使用可放-20℃保存。

二、样本注意事项

(1)细胞无需离心,在含/不含血清的环境中均可直接使用。

(2)扩增2kb 以内片段,细胞样品浓度不超过1000 个细胞。如若扩增片段超过2kb,可适当提高细胞浓度。

(3)不同组织使用不同的眼科剪和眼科镊进行处理,防止交叉污染导致检测结果偏差。

(4)组织样本仅需要采集1-2mm。

三、试剂盒使用过程中注意事项

(1)PCR 过程中推荐使用阴性对照和阳性对照。

(2)整个过程中使用的吸头、离心管等耗材应丢弃在含有75%乙醇或核酸消除剂的容器中,减少环境污染。

(3)2×Master TaqMix(With Dye)已包含染料,可在反应结束后直接进行琼脂糖凝胶电泳。

(4)PCR 产物3’末端含有A,可直接进行TA 克隆。

四、试剂盒使用后注意事项

(1)TC-DNA Lysis 处理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 个月。避免反复冻融,防止基因组断裂。

(2)PCR 反应完成后,严禁在实验区开盖。应在污染区进行琼脂糖凝胶电泳,防止气溶胶污染。

(3)为防止试剂盒污染,请勿将不同批号试剂盒混用。

检测实例

来源范围

细胞 293T、A549、Vero、PK15、Sp2/0、HCT-116、Marc145、ST、siHa、MCF-7

人 头发、唾液、咽拭子、指甲

小鼠 心、肝、脾、肺、肾、脑、脊柱、胃、大肠、小肠、胆囊、尾巴、脚趾、皮、

耳朵、肌肉、EDTA 抗凝血、肝素钠抗凝血、枸橼酸钠抗凝血

猪 心、肝、脾、肺、肾、脑、淋巴结、咽拭子、唾液、精液、全血、血清

鸡 心、肝、脾、肺、胃

亚洲鲫鱼 鱼鳍、鱼泡、鱼鳞、鱼籽

常见问题解析



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