本试剂盒采用裂解液DPP 在10 分钟内完成植物叶片、根、茎、花蕊、种子等裂解、提取和纯化。提取对象包括棉花、马铃薯、铁皮石斛等。整个提取过无需使用蛋白酶K 等酶类制剂。提取DNA可用于PCR、qPCR、Sorthern Blot、分子克隆、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、无DNase 和无RNase 离心管、β-巯基乙醇、RNaseA(10mg/mL,或货
号QR0101)
使用方法
1. 20-100mg 新鲜植物样本经过液氮研磨后,加入700μL 裂解液DPP 和35μL β-巯基乙醇,涡旋30秒。
2. 55℃孵育1 分钟。备注:淀粉含量高的样本直接进行步骤3。
3. 12,000rpm 离心1 分钟,吸取500μL 上清液。
4. (选做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室温静置5-10 分钟。
5. 加入250μL 无水乙醇,上下颠倒混匀。
6. 全部加入DNA 吸附柱中,12,000rpm 离心1 分钟,倒掉收集管中废液。
7. 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗涤液DPW1,12,000rpm 离心30 秒,倒掉收集管中废液。
8. 向DNA 吸附柱中加入500μL 洗涤液DPW2,12,000rpm 离心30 秒,倒掉收集管中废液。
9. 重复步骤8 一次。
10. 12,000rpm 离心2 分钟,倒掉收集管中废液。
11. 将DNA 吸附柱放入新无DNase 和无RNase 离心管中,加入30-50μL 洗脱液P,室温放置1 分钟。
12. 12,000rpm 离心2 分钟,得到DNA 溶液,-80℃保存。
注意事项
1. 经常更换手套,防止DNA 污染。
2. 使用无DNase 无RNase 的吸头和离心管,防止DNA 降解。
3. 常更换吸头,防止交叉污染。
4. 动作轻柔,防止基因组DNA 断裂。
5. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液P 置于65℃水浴后再使用。