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ColProof细胞和组织RNA快速提取试剂盒产品介绍
更新时间:2023-07-05   点击次数:449次

Col-R0101 试剂盒应用 本试剂盒采用裂解液配方在 10 分钟内完成细胞和组织样本的裂解、提取和纯化。无需使用蛋白酶 K、无需低温离心,无需使用有机试剂。该配方中含有 RNA 保护剂,能够抑制RNA降解、保护RNA 完整,从而提高 RNA 产量。提取 RNA 可用于 RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。 本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。


保存条件

室温保存一年。

自备材料

水浴锅或金属浴、无水乙醇、无 DNase 无 RNase 离心管、DNase I(2U/μL,或货号QR0102)使用方法

1. 样本处理

1.1 从动物组织中提取 RNA

1.1.1 取 20-100mg 样本放入液氮中充分研磨后,加入 700μL 裂解液 C,颠倒混匀。或者取 20-100mg 样本加入 700μL 裂解液 C,加入 1 颗钢珠,放入组织研磨器中,研磨1-2 分钟。备注:不同样本中 RNA 含量差异很大,过多使用样本容易导致堵塞,最终导致RNA提取量下降。

1.1.2 55℃孵育 1 分钟。

1.1.3 12,000rpm 离心 1 分钟,取 500μL 上清。

1.1.4 加入 250μL 无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。

1.2 从悬浮细胞中提取 RNA

1.2.1 细胞 1,000rpm 离心 5 分钟,收集细胞沉淀。

1.2.2 细胞数量为<5x106个时,加入 500uL 解液 C。细胞数量为 5x106~1x107个时,加入 700uL 裂解液 C。轻轻吹打混匀。55C孵育 1分钟。

1.2.3 12.000rpm 离心1 分钟。

1.2.4 细胞数量为 5×10 6个时,取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,取650μL 上清。

1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。

1.3 从贴壁细胞中提取 RNA

1.3.1 胰酶消化细胞后 1,000rpm 离心 5 分钟,收集细胞沉淀。

1.3.2 细胞数量为<5×10 1="" 10="" l="" 1.3.3="" 000rpm="" 1.2.4=""><5×10 10="" l="" 1.2.5="" 0.5="" 2.1-2.7="">为<5×10 6个时,取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。

2. RNA 纯化

2.1 全部加入 RNA 吸附柱中,12,000rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中废液。

2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW1,12,000rpm 离心 30 秒,倒掉收集管中废液。

2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW2,12,000rpm 离心 30 秒,倒掉收集管中废液。


2.4 重复步骤 2.3 一次。

2.5 12,000rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。

2.6 将 RNA 吸附柱放入无 DNase 无 RNase 离心管中,加入 30-50μL 洗脱液C,室温放置1 分钟。

2.7 12,000rpm 离心 2 分钟,得到 RNA 溶液,-80℃保存。

注意事项

1. 务必在超净台中进行操作,常换手套,防止 RNA 降解。

2. 尽可能使用新鲜样本进行 RNA 提取。

3. 使用无 DNase 无 RNase 的吸头和离心管,防止 RNA 降解,常更换吸头,防止交叉污染。

4. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液 C 置于 65℃水浴后再使用。

5. 根据后续试验需求,请使用 DNase I(货号 QR0102)进行基因组清除。





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