Col-R0101 试剂盒应用 本试剂盒采用利裂解液配方在 10 分钟内完成细胞和组织样本的裂解、提取和纯化。无需使用蛋白酶 K、无需低温离心,无需使用有机试剂。该配方中含有 RNA 保护剂,能够抑制RNA降解、保护RNA 完整,从而提高 RNA 产量。提取 RNA 可用于 RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。 本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等域。
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、无 DNase 无 RNase 离心管、DNase I(2U/μL,或货号QR0102)使用方法
1. 样本处理
1.1 从动物组织中提取 RNA
1.1.1 取 20-100mg 样本放入液氮中充分研磨后,加入 700μL 裂解液 C,颠倒混匀。或者取 20-100mg 样本加入 700μL 裂解液 C,加入 1 颗钢珠,放入组织研磨器中,研磨1-2 分钟。备注:不同样本中 RNA 含量差异很大,过多使用样本容易导致堵塞,终导致RNA提取量下降。
1.1.2 55℃孵育 1 分钟。
1.1.3 12,000rpm 离心 1 分钟,取 500μL 上清。
1.1.4 加入 250μL 无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.2 从悬浮细胞中提取 RNA
1.2.1 细胞 1,000rpm 离心 5 分钟,收集细胞沉淀。
1.2.2 细胞数量为<5x106个时,加入 500uL 解液 C。细胞数量为 5x106~1x107个时,加入 700uL 裂解液 C。轻轻吹打混匀。55C孵育 1分钟。
1.2.3 12.000rpm 离心1 分钟。
1.2.4 细胞数量为 5×10 6个时,取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,取650μL 上清。
1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
1.3 从贴壁细胞中提取 RNA
1.3.1 胰酶消化细胞后 1,000rpm 离心 5 分钟,收集细胞沉淀。
1.3.2 细胞数量为<5×10 6个时,加入 500μL 裂解液 C。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,加入700μL裂解液 C。轻轻吹打混匀。55℃孵育 1 分钟。 1.3.3 12,000rpm 离心 1 分钟。 1.2.4 细胞数量为><5×10 6个时,取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。>为<5×10 6个时,取 450μL 上清。细胞数量为 5×10 6~1×10 7个时,取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍体积无水乙醇,充分混匀。按照步骤 2.1-2.7 操作。
2. RNA 纯化
2.1 全部加入 RNA 吸附柱中,12,000rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中废液。
2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW1,12,000rpm 离心 30 ,倒掉收集管中废液。
2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗涤液 CW2,12,000rpm 离心 30 ,倒掉收集管中废液。
2.4 重复步骤 2.3 一次。
2.5 12,000rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中废液。
2.6 将 RNA 吸附柱放入无 DNase 无 RNase 离心管中,加入 30-50μL 洗脱液C,室温放置1 分钟。
2.7 12,000rpm 离心 2 分钟,得到 RNA 溶液,-80℃保存。
注意事项
1. 务必在超净台中进行操作,常换手套,防止 RNA 降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行 RNA 提取。
3. 使用无 DNase 无 RNase 的吸头和离心管,防止 RNA 降解,常更换吸头,防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率,可提将洗脱液 C 置于 65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求,请使用 DNase I(货号 QR0102)进行基因组清除。
15021202164
上海市杨浦区国康路100号2层
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