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透射电镜样本准备方法及要求
更新时间:2023-12-27   点击次数:1068次

以下所有样本必须新鲜,固定液或悬浮液都不得冷冻结冰!

 

1、 动物组织样本

  1-3min内取样,取材前可提前准备装有电镜固定液的培养皿,将小组织块离体取下后立即投入培养皿内,用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成小块,取样组织体积控制在以下尺寸(1mmX1mm×1mm正方体、1mm×1mm×3mm长方体状、1mm×2mm×3mm薄片状)。固定液渗透能力有限,超出此范围后组织会无法

透射电镜图片.png

固定,后续实验无法完成,务必请重视此过程。

 


  取材时尽量精确到需要观察的目的部位(如观察肾小球取肾皮质;观察胰岛取胰岛丰富的胰尾;皮肤,肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定)。

  取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。

  组织取下后立即投入电镜固定液内4度避光固定24h,再转移至4°保存,4°冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。4°时样本可保存1个月左右

2、 植物组织样本

  取材要求同动物组织样本。

  组织投入固定液后需要进行真空抽气让组织沉底,如无条件抽气可用滤纸将组织塞进固定液内,组织不能漂浮在固定液表面。(抽气做出来的效果会好一些)

3、 细胞样本

贴壁细胞:

(看细胞凋亡的,需要把培养液中的细胞也离心收集后固定)

方法一:消化法(实验目的不涉及观察细胞膜相关的内容  如:观察紧密连接)

①培养好的细胞(细胞密度不超过70%)弃培养基,加入胰酶消化。

②胰酶消化好后(时间不宜过长),加培养基终止消化,吸管轻轻吹打至细胞起浮。吸入离心管,低速离心(不超过3000转),3-5min左右,细胞团要有绿豆大小。

③弃上清,加入电镜固定液,细胞团吹散重悬。

4度避光固定24h,再转移至4°保存,4°冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

方法二:刮取法

①培养好的细胞(细胞密度不超过70%)弃培养基,加入电镜固定液(固定液需提前恢复至室温)。

②常温避光固定5min左右,用细胞刮(或软橡胶盖切得平整小方块)沿一个方向轻轻刮下细胞,切记不要反复刮,避免细胞刮破。

③用巴氏吸管把细胞液吸入离心管内,放入离心机(不超过3000转),低速离心3-5min左右,细胞团要有绿豆大小。

④弃固定液后加新的电镜固定液,细胞团吹散重悬。

4度避光固定24h,再转移至4°保存,4°冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细胞:离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀有绿豆大小,弃培养基后加电镜固定液4度避光固定24h,再转移至4°保存,4°冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

 

4、 细菌样本

长于固体培养基的细菌:连带着培养基一起挑下细菌放于电镜固定液内4度避光固定24h,再转移至4°保存, 4°冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

 

悬浮细菌孢子等:离心收集细菌要肉眼可见细菌沉淀绿豆大小,弃培养基后加电镜固定液4度避光固定24h,再转移至4°保存,4°冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

5、 病毒

破碎组织细胞,粗离心去除细胞碎片取上清,超速离心分离出病毒(病毒提取的过程需要客户自己完成)。用缓冲液(如PBS)悬浮病毒,体积至少50ul,远距离干冰冻存运输,近距离4°保存运输,尽快滴片做负染后及时电镜观察拍照。(噬菌体 4度运输)

6、 外泌体囊泡等

客户自己完成外泌体囊泡等的提取收集,用缓冲液(如PBS)或者试剂盒中的保存液悬浮,,体积至少50ul,远距离干冰冻存运输,近距离4°保存运输,尽快制片做负染后及时电镜观察拍照。(因此类样品极易降解,样品越新鲜越好,最好数小时内完成滴片负染,否则做出的效果很不理想甚至观察不到)

7、 纳米材料等无机材料

直接准备粉剂,或用纯水或无水乙醇悬浮,常温保存运输即可(需要超声的备注)。做负染后电镜观察拍照。


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