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裸鼠皮下成瘤实验介绍2024年已更新
更新时间:2024-04-25   点击次数:94次

裸鼠皮下成瘤实验介绍2024年已更新

裸鼠肿瘤模型

 

无胸腺裸鼠(Nude Mouse,简称裸鼠)目前已成为医学生物学研究领域中*的实验动物模型,它是先天性胸腺缺陷的突变小鼠,裸鼠接种成活的肿瘤对化疗药物的敏感性与临床所见十分相近。根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量,一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤大小测量一般为1周两次,游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位,肿瘤不宜生长过大,一般不要超过1000mm3

 

 裸鼠肿瘤模型实验步骤

1、细胞的状态是成瘤实验的关键,所以细胞生长状态一定要好,取处于对数生长期的细胞,细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。

 

2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍,目的为去除细胞中的血清。

 

3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度,一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支,接种体积为0.1ml,因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml

 

4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下,一般尽量在半小时内完成,途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。

 

5、选择的裸鼠一般在5-8周龄,体重18-20g左右,种植部位选择血供丰富区域,如腋窝中后部、腹股沟中上部。

 

6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散,防止细胞成团而降低细胞成活率。

 

7、接种时,针头在皮下进针深一点,约1cm深,减少注射后细胞悬液从针眼溢出。

 

8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤,小拇指夹住裸鼠尾巴。

 

9、接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。

 

10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量,一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大,一般不要超过1000mm3 ,肿瘤负荷过大常常会以违背动物伦理而被杂志社刁难(因为这个问题悲惨地被plos one拒过稿)。

 

11、肿瘤大小测量一般为1周两次,游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2 (a为长轴,b为短轴)

 

12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA,一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等

 


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