透射电镜样本准备方法及要求

以下所有样本必须新鲜，固定液或悬浮液都不得冷冻结冰！

1、 动物组织样本

① 1-3min内取样，取材前可提前准备装有电镜固定液的培养皿，将小组织块离体取下后立即投入培养皿内，用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成小块，取样组织体积控制在以下尺寸(1mmX1mm×1mm正方体、1mm×1mm×3mm长方体状、1mm×2mm×3mm薄片状)。固定液渗透能力有限，超出此范围后组织会无法固定，后续实验无法完成，务必请重视此过程

② 取材时尽量精确到需要观察的目的部位（如观察肾小球取肾皮质；观察胰岛取胰岛丰富的胰尾；皮肤，肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定）。

③ 取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。

④ 组织取下后立即投入电镜固定液内4度避光固定24h，再转移至4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中样本和冰袋需间隔，固定液切勿冷冻结冰。4°时样本可保存1个月左右

2、 植物组织样本

① 取材要求同动物组织样本。

② 组织投入固定液后需要进行真空抽气让组织沉底，如无条件抽气可用滤纸将组织塞进固定液内，组织不能漂浮在固定液表面。（抽气做出来的效果会好一些）

3、 细胞样本

贴壁细胞：

（看细胞凋亡的，需要把培养液中的细胞也离心收集后固定）

方法一：消化法（实验目的不涉及观察细胞膜相关的内容  如：观察紧密连接）

①培养好的细胞（细胞密度不超过70%）弃培养基，加入胰酶消化。

②胰酶消化好后（时间不宜过长），加培养基终止消化，吸管轻轻吹打至细胞起浮。吸入离心管，低速离心（不超过3000转），3-5min左右，离心后管底要有肉眼可见的细胞沉淀，厚度不要超过2毫米。

③弃上清，缓慢加入电镜固定液（固定液需提前恢复至室温）。加固定液过程中不要吹散细胞，如果吹散了需再次低速离心。

④4度避光固定24h，再转移至4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中样本和冰袋需间隔，固定液切勿冷冻结冰。

方法二：刮取法

①培养好的细胞（细胞密度不超过70%）弃培养基，加入电镜固定液（固定液需提前恢复至室温）。

②常温避光固定5min左右，用细胞刮（或软橡胶盖切得平整小方块）沿一个方向轻轻刮下细胞，切记不要反复刮，避免细胞刮破。

③用巴氏吸管把细胞液吸入离心管内，放入离心机（不超过3000转），低速离心3-5min左右，离心后管底要有肉眼可见的细胞沉淀，厚度不要超过2毫米。

④弃上清，缓慢加入电镜固定液（固定液需提前恢复至室温）。缓慢加入固定液过程中不要吹散细胞，如果吹散了需再次低速离心。

⑤4度避光固定24h，再转移至4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中样本和冰袋需间隔，固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细胞：离心收集细胞要肉眼可见细胞沉淀有绿豆大小，弃培养基后加电镜固定液4度避光固定24h，再转移至4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中样本和冰袋需间隔，固定液切勿冷冻结冰。

4、 细菌样本

长于固体培养基的细菌：连带着培养基一起挑下细菌放于电镜固定液内4度避光固定24h，再转移至4°保存， 4°冰袋运输，在保存和运输过程中样本和冰袋需间隔，固定液切勿冷冻结冰。

悬浮细菌孢子等：离心收集细菌要肉眼可见细菌沉淀绿豆大小，弃培养基后加电镜固定液4度避光固定24h，再转移至4°保存，4°冰袋运输，在保存和运输过程中样本和冰袋需间隔，固定液切勿冷冻结冰。

5、 病毒

破碎组织细胞，粗离心去除细胞碎片取上清，超速离心分离出病毒（病毒提取的过程需要客户自己完成）。用缓冲液（如PBS）悬浮病毒，体积至少50ul，远距离干冰冻存运输，近距离4°保存运输，尽快滴片做负染后及时电镜观察拍照。（噬菌体 4度运输）

6、 外泌体囊泡等

客户自己完成外泌体囊泡等的提取收集，用缓冲液（如PBS）或者试剂盒中的保存液悬浮，，体积至少50ul，远距离干冰冻存运输，近距离4°保存运输，尽快制片做负染后及时电镜观察拍照。（因此类样品极易降解，样品越新鲜越好，最好数小时内完成滴片负染，否则做出的效果很不理想甚至观察不到）

7、 纳米材料等无机材料

直接准备粉剂，或用纯水或无水乙醇悬浮，常温保存运输即可（需要超声的备注）。做负染后电镜观察拍照。