NuSmart^®核酸直接释放技术细菌鉴定中的应用方向

细菌属于原核生物的一种，虽然结构相对简单，但是在生物界属于数量最多的一类生物。细菌在生物界扮演着多重角色，既有乳品生产、抗生素生产、废水处理等积极的一面，也有作为病原菌感染人和牲畜从而导致疾病传播的危害一面。所以了解和控制细菌的特征和特性，对日常生产生活至关重要。

实验室条件下，细菌的鉴定主要有培养、生化鉴定、血清学鉴定等，但是这些方法均费时费力，尤其是细菌培养。而分子生物学方法是近年来更多被应用的方法，例如PCR技术。该技术对不易生长，培养条件复杂，未知细菌等表现良好。总结发现PCR在细菌中的应用包括以下方向：

1、基于16S rDNA基因的快速鉴定；

2、特异性基因的鉴定，例如毒力基因、耐药基因等；

3、食品微生物检测；

4、细菌数量动态检测；

5、常见呼吸道病原菌筛查；

6、细菌DNA图谱制作等。

对于实验室工作人员来说，细菌难培养，细菌增殖数量不够，环境中细菌复杂程度高等难点。而能够成功培养到目标细菌，且数量达标是PCR的关键前提。目前实验室工作人员常用细菌DNA柱式提取试剂盒进行基因组DNA的提取纯化。该方法作为经典方法长期被使用，但是整个操作过程需要40-90分钟不等，使用溶菌酶和蛋白酶K等生物活性酶类，多次反复离心，步骤繁多、使初学的操作者体验乐趣严重降低。我司开发的NuSmart^®微生物 PCR 试剂盒che底解决以上痛点问题。优点如下：

—对样本量要求低（1-2uL菌液，1个菌斑）

—操作快速（5分钟释放基因组DNA）

—操作简单

—检出率达99.99%

案例A 对数生长期细菌快速扩增16S rDNA

革兰氏阴性菌：1 大肠杆菌 2 胞曼氏不动杆菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇异变形杆菌 5 铜绿假单胞菌

革兰氏阳性菌：6 蜡状芽孢杆菌 7 粪肠球菌 8 肺炎链球菌 9 金黄色葡萄球菌 10 假中间葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 试剂盒（货号Nu-Mi01）处理对数生长期菌液，2× MIC Smart Mix扩增16S rDNA基因。

案例B 单菌落快速扩增16S rDNA

革兰氏阴性菌：1 大肠杆菌 2 胞曼氏不动杆菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇异变形杆菌 5 铜绿假单胞菌

革兰氏阳性菌：6 蜡状芽孢杆菌 7 粪肠球菌 8 肺炎链球菌 9 金黄色葡萄球菌 10 假中间葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 试剂盒（货号Nu-Mi01）处理菌斑（至于生理盐水中），2× MIC Smart Mix扩增16S rDNA基因。

案例C 甘油菌快速扩增16S rDNA

革兰氏阴性菌：1 大肠杆菌 2 胞曼氏不动杆菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇异变形杆菌 5 铜绿假单胞菌

革兰氏阳性菌：6 蜡状芽孢杆菌 7 粪肠球菌 8 肺炎链球菌 9 金黄色葡萄球菌 10 假中间葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 试剂盒（货号Nu-Mi01）处理甘油菌，2× MIC Smart Mix扩增16S rDNA基因。