RAW264.7细胞转染效率低怎样提高转染效率一直是困扰实验者的一道难题,特别对于比较大的质粒DNA的转染更是困难;我们实验室用美国Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂货号AD600150转染raw 264.7细胞整理了一套优化方案希望对大家转染raw 264.7细胞提高转染效率有一定的帮助。
下图是用美国Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂货号AD600150在6孔板转染8000bp左右的pEGFP-C1r到RAW264.7细胞的荧光和细胞明场图片。
提高转染raw 264.7细胞条件如下
一、质粒DNA准备
1、质粒DNA浓度700ng/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素),我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素
二、操作流程
1、先将细胞接种到细胞培养板,细胞汇合度在70%左右,再进行转染。
2、复合物制备:将质粒DNA与Zeta Life公司Advanced DNA RNA货号AD600150转染试剂按照1:1(12ug:12ul)关系直接混合,用移液器吹吸10-15次混匀,室温静止10-15分钟。
3、将复合物加入*培养基的细胞培养板,并轻轻混匀,放入培养箱中继续培养(不建议把复合物加入到无血清的培养基里面,我后期会进一步摸索此条件)。
4、转染24小时后对细胞进行正常换液。
5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率
三、注意事项:
1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如:lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等;
2细胞培养Zeta Life z7181-500胎牛血清,Gibco的DMEM;
四、美国Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂信息:
产品名称 | 货号 | 规格 | 数量 | 报价 |
Advanced DNA RNA 转染试剂 | AD600025 | 0.25ML | 1 | 1590 |
Advanced DNA RNA 转染试剂 | AD600050 | 0.5 | 1 | 2390 |
Advanced DNA RNA 转染试剂 | AD600075 | 0.75 | 1 | 2890 |
Advanced DNA RNA 转染试剂 | AD600150 | 1.5ML | 1 | 4490 |
Advanced DNA RNA 转染试剂 | AD600500 | 5ML | 1 | 电询 |
Advanced DNA RNA 转染试剂 | AD601000 | 10ML | 1 | 电询 |
15021202164
上海市杨浦区国康路100号2层
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