MACS磁珠分选免疫细胞分离生物学

MACS磁珠分选免疫细胞分离生物学

一、免疫磁珠法分离细胞原理

免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。

二、MACS微珠（MicroBeads）

MACS微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，用于目的细胞分离或者去除细胞的磁性标记。微珠直径约有50nm，比细胞小200多倍，体积为细胞的百万分之一，光学显微镜下不可见。微珠由多聚糖和氧化铁组成，无毒性，对细胞无损伤，可以生物降解。MACS微珠与流式细胞仪兼容，不会影响细胞的光散射特性；磁性标记只占用20－30％的结合位点，不影响细胞的荧光抗体标记。此外，MACS微珠可以大限度地避免细胞活化；无需解离磁珠，可以直接进行后续实验：如流式细胞仪分析或分选、细胞培养、分子生物学研究、回输给人或者动物。

MACS微珠主要有三种：直标微珠、间标微珠、多选微珠。其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠。多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠。这种微珠通过特殊的方式与抗体偶联，在一次阳性分选完成后，与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来，阳性分选的细胞可以进行再次阳性分选或者去除分选。

三、MACS分选柱（Separation Column） 

MACS分选柱是一类填充有不同规格铁珠的塑料容器，铁珠表面有亲水包被，因此不会损伤细胞。在磁场外MACS分选柱不带有磁性，但是当置于一个磁场—MACS分选器中时，分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场增强1000倍，足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞；磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作用，从而提高分选纯度和回收率。手动操作在30分钟内可完成，自动分选仅需2.5-10分钟，得到的细胞可立即用于后续实验。此外，大多数MACS分选柱都是无菌包装，一次性使用，可以满足细胞培养所需的无菌条件。

四、MACS分选器（MACS Separators） 

MACS分选器由磁铁和支架构成。与分选柱一起组成高强度的梯度磁场。根据应用范围分为研究用和临床应用的MACS分选器，根据操作方式分为手动和自动分选器。

1、MiniMACS分选器和OctoMACS分选器

MiniMACS分选器是专为手动分选动、植物细胞，细菌、病毒、细胞器和mRNA等分子而设计的。该设备价格低廉，快速分选，应用广泛，易于操作，是获得少量高纯度细胞的理想设备。OctoMACS分选器把8个MiniMACS分选器连在一起，可以在一台仪器上同时进行8个标本的分选。

  
 2、MidiMACS分选器和QuadroMACS分选器

MidiMACS分选器是MiniMACS分选器的扩大版本，与LS和LD分选柱配合使用，可阳性选择或者去除大量高纯度细胞。QuadroMACS分选器把4个MidiMACS分选器连在一起，可以同时进行多个分选过程，或者同时进行多个样本分选，也可将一个大的样本分成数个部分同时分选。

3、VarioMACS分选器

VarioMACS分选器有多种适配器，可以使用MS、LS、LD和CS分选柱。可用于阳性选择和去除分选：既可高纯度地分选出稀有细胞，也可用来从细胞悬液中去除多达2×108非目的细胞。

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