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人尿源间充质干细胞扩增培养试剂盒

人尿源间充质干细胞扩增培养试剂盒

更新时间:2020-07-30

简要描述:

人尿源间充质干细胞扩增培养试剂盒该试剂盒为经过优化的低血清(2%V/V )尿源间充质干细胞( Urine-derived mesenchymal stem cell,USC)体外扩增专用培养基。低血清降低了胎牛血清对尿源干细胞特性和分化的不利影响,

产品货号:AV1501-B

产品名称:人尿源间充质干细胞扩增培养试剂盒

Human urine-derived mesenchymal stem cell expansion kit

 

人尿源间充质干细胞扩增培养试剂盒产品描述

该试剂盒为经过优化的低血清(2%V/V )尿源间充质干细胞( Urine-derived mesenchymal stem cell,USC)体外扩增专用培养基。低血清降低了胎牛血清对尿源干细胞特性和分化的不利影响,稳定性更加,适用于实验室科研。生长因子、激素的联合应用维持了干细胞特性及旺盛的细胞增殖能力,配合人尿源间充质干细胞分离试剂盒可在短时间内收获大量细胞。

 

产品内容

使用说明

人尿源间充质干细胞扩增完全培养基的配制:

将扩增培养基添加剂置于2- -8C环境中过夜解冻直至完全溶解,混合均匀,与扩增基础培养基混合配置为500mL人尿源间充质干细胞扩增完全培养基

注意事项:

配好后避光2- -8C保存,4周内使用完毕

所有产品请于保质期内使用,超过保质期,必须放弃使用

为确保产品质量,请避免反复冻融相关产品

1、人尿源间充质干细胞(USC)扩增与传代:

1)细胞隔天换液,待镜下细胞融合率达80%~90%,即可消化传代

2)室温0.25% EDTA-胰酶消化USC (一般不超过1min),镜下观察,待细胞边缘透亮、变圓时,加入适量USC扩增培养基终止消化,吹打混匀,重悬细胞

3) 1200rpm, 4min离心

4)弃上清, USC扩增培养基重悬细胞,按1:4比例接种至培养皿,进行后续培养

 

注意事项:

●USC细胞生长速率较快,待细胞融合率达80~90%或内部生长空间较小时即可进行消化传代,因干细胞接触抑制易影响其增殖活力。

本培养基可体外扩增USC10代左右,代数增加会加速细胞老化,细胞实验尽量在P7代前进行,分化实验尽量取代数较早细胞(P3代左右)进行。

2USC冻存

1)配制冻存液: DMSO:血清= 200u: 800ul

2) 0.25% EDTA-胰酶消化USC 1分钟左右,加入3- 5ml USC扩增培养基终止消化,吹打混匀细胞悬液

3) 1200rpm, 4min离心

4)弃上清,500ul USC扩增培养基重悬

5)1ml冻存液逐滴缓慢加入细胞悬液,混匀后转移进冷冻管中,总体系1.5mL

6)标记名称、代数、日期,封好封口膜,放入梯度冻存盒

7)将冻存盒放入-809C, 24小时后(第二天)转入液氮保存

注意事项:

慢冻速溶,冻存细胞缓慢梯度降温,可配合使用梯度冻存盒,-809C冻存后尽早转入液氮保存

3USC复苏

1) 379C水浴锅打开备用

2)从液氮取出细胞,放入水浴锅速溶,时间控制在1分半钟内

3)将冻存管内液体缓慢加入5ml USC扩增培养基内,吹打混匀

4) 1200rpm, 4min离心

5)弃上清,加入适量USC扩增培养基,接种至培养皿

6)复苏24小时后(第二天)全换液

 

注意事项:

慢冻速溶,复苏细胞水浴时间尽量控制在一-分半钟,可晃动加速溶解

复苏后第二天(细胞贴壁后)尽早全换液,减少DMSO对细胞的毒性损伤

为保证细胞活力,请避免反复冻融细胞

本尿源间充质干细胞扩增培养基已经过人尿源间充质干细胞性能测试,详见附图(3, 4, 5)

质量控制

无菌检测(细菌、真菌和支原体检测)

√pH测试

渗透压检测

内毒素检测

 

附图3人尿源间充质干细胞体外扩增传代图片(光镜: 100X )

 

附图4人尿源间充质干细胞表面标记物鉴定

CD29CD73CD90CD44等间充质干细胞(MSC)特异性表面标记物强阳性表达,SSEA-4多潜能干性标记物强阳性表达,造血干细胞、内皮细胞来源的标记物CD45CD34CD31HLA-DR等均阴性,鉴定其为MSC来源

 

附图5人尿源间充质干细胞体外定向诱导后向脂肪、成骨、软骨细胞分化

成骨: ALP+;茜素红+; RUNX2OCN+

成脂:脂滴+;油红O+

成软骨:甲苯胺蓝+; SOX9COL II+

 

References

1.Zhang,Y.,et a1.(2008). Urine Derived Cells are a Potential Source for Urological Tissue Reconstruction. J urol

180(5):2226- -33.

2. Zhou,T,et al.(2012).Generation of human induced pluripotent stem cells from urine samples. Nat Portoc

7(12):2080-9.

3.Bharadwaj,S. ,et al (2013).Multipotential differentiation of human urine- -derived stem cells: potential for

therapeutic applications in urology.Stem Cells 31(9):1840-56.

4.Ji,X,et al.(2017).Urine-Derived Stem Cells: The Present and the Future.Stem Cells Int 2017:4378947.

5.Falzarano,M.S.,et al.(2019).Urinary Stem Cells as Tools to Study Genetic Discase: Overview of the Literature.J

Clin Med 8(5). pil: E627.

6.Wang,L.,et al.(2013).Generation of integration- -free neural progenitor cells from cells in human urine.Nat

Methods 10(1):84- -9.

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