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DH5 aλpir感受态细胞

DH5 aλpir感受态细胞

更新时间:2020-09-14

简要描述:

DH5 aλpir感受态细胞 CLBio DH5a入pir 菌株来源于DH5a,在DH5a大肠杆菌基因组中引入LAMpir,即为DH5a入pir,该菌株可以表达PIR蛋白,使得含有R6Kg ori 复制子的质粒可以在其中正常复制。

DH5 aλpir感受态细胞

产品货名:DH5αλpir Chemically Competent Cell
产品货号:G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)
规格/简介:G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)

 

基因型

F- φ80 lac ZM15(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk- , mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

简要说明|

CLBio DH5a入pir 菌株来源于DH5a,在DH5a大肠杆菌基因组中引入LAMpir,即为DH5a入pir,该菌株可以表达PIR蛋白,使得含有R6Kg ori 复制子的质粒可以在其中正常复制。DH5a入pir 菌株缺失核酸内切酶(endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性; lacZOM15 的存在使DH5a可用于蓝、白斑筛选;但DH5a入pir 菌株生长速度较慢,在平板培养或液体摇菌时应延长生长时间。CLBio DH5a λpir感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>1X109 cfu/ μg DNA。

DH5 aλpir感受态细胞操作说明:

1. DH5a λpir 感受态细胞从-80°C拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手打EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2.42*C水浴热激45秒,迅速放回冰.上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μ1不含抗生素的无菌LB培养基,混匀后37°C,200 rpm复苏70分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体,留取100 μl左右上清轻轻吹打重恳菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5.将平板倒置放于37°C培养箱至少18小时。

注意事项

1.感受态细胞在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2.DH5aλpir菌株生长缓慢,在平板上培养或液体摇菌时应延长菌体生长时间(37°C, 18 小时以上)。

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。


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