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MTT法检测某种药物对神经干细胞的增殖实验报告
发布时间:2019-12-09   点击次数:364次

一、 实验仪器与试剂

表格一:实验仪器

仪器

厂家

型号

细胞培养箱

Thermo Scientific

HERA cell CO2

酶标仪  

Thermo Scientific

Multiskan Spectrum

 

表格二:试剂

试剂

厂家

DMEM/F12 培养基

Gibco

MTT

Sigma

胰酶

索来宝

DMSO

Sigma

 

二、 实验步骤

收集生长状态良好的神经干细胞,消化并调整细胞悬液浓度,分于 96 孔板,

每孔 100μL,5000 个细胞/孔。

细胞置于 37 ℃、5% CO2培养箱中培养过夜后,小心弃去培养基。

根据药物在细胞溶液中的终浓度使用细胞培养液配制相应的药物储备液,随后加入至相应培养液中形成不同浓度的工作液(药物在工作液中的体积比为 5%)。每孔细胞分别加入 100μL 相应的工作液,每种浓度均设 3 个复孔。同时设置正常培养孔(只加入完全培养液培养的细胞)和空白孔(没有细胞,只加入相同量的完全培养液)。

37 ℃、5% CO2培养箱中培养 24h 后小心吸去上清,加入 80μL 新鲜培养液

和 20μL MTT 溶液(5 mg/mL),并继续培养 4h。

吸掉上清,每孔加入 150μL DMSO,置摇床上低速振荡 10 min,使结晶物充分溶解。在酶标仪 490 nm 处测量各孔的 OD 值。

计算细胞生长抑制率%

实验组OD值-空白组OD值

=1- ´100% 对照组OD值-空白组OD值

 

三、 实验结果

 

药物浓度

1mM

2mM

3mM

4mM

5mM

OD 值

0.648678

0.651091

0.714305

0.777446

0.797002

0.672702

0.712622

0.760024

0.783670

0.780728

0.678589

0.733039

0.778568

0.806155

0.772555

0.653876

0.699670

0.739670

0.778650

0.776490

0.628845

0.687968

0.777404

0.758746

0.799384

均值

0.656538

0.696878

0.753994

0.780933

0.785232

细胞生长抑制率 %

Mean±SD

23.87±1.99

18.76±3.06

11.51±2.72

8.10±1.70

7.55±1.22 

 

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