一、 实验仪器与试剂
表格一:实验仪器
仪器 | 厂家 | 型号 |
细胞培养箱 | Thermo Scientific | HERA cell CO2 |
激光共聚焦显微镜 | Leica | TCS SP5 |
表格二:试剂
试剂 | 厂家 |
细胞培养基 | Gibco |
PBS (0.1 M, pH 7.4) | 自配 |
4 %多聚甲醛溶液 | 索来宝 |
BSA | Sigma |
Triton-x-100 | 生工生物 |
FITC 标记羊抗兔荧光二抗 | Santa Cruz |
DAPI | 碧云天 |
二、 实验步骤
制作细胞爬片,根据实验方案进行加样操作;
反应 24h 后,弃原有培养液, PBS 洗 1 次;
4%的多聚甲醛 4 度固定 15 分钟,PBS 洗 2 次,5 分钟/次;
4. 加入 0.1%的 Triton-x-100,室温孵育 15 分钟;
5. PBS 洗 3 次,5 分钟/次;
6. 10%BSA 封闭 30 分钟;
加入一抗 50μL(稀释度为 1:100),4℃过夜孵育;
第二天复温 30min,PBS 洗 3 次,5 分钟/次;
每组分别加入 FITC 标记羊抗兔荧光二抗 50μL(稀释度为 1:500),37℃培养 30 分钟;
PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;
11. DAPI 染色 5 分钟;
PBS 洗 3 次,每次 5 分钟;
在激光共聚焦显微镜上观察(使用 405nm 和 488nm 的激发光源进行荧光检测)。
三、 实验结果
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上海市杨浦区国康路100号2层
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