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琼脂糖是用于什么样的实验你了解吗?
发布时间:2020-03-18   点击次数:84次
   琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA 分子的迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA 分子的迁移速度与相对分子量成反比。
  不同构型的 DNA 分子的迁移速度不同。如环形 DNA 分子样品,其中有三种构型的分子:超螺旋分子(cccDNA)、开环分子(ocDNA)、和线形 DNA 分子(IDNA)。这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA>IDNA>ocDNA。
  核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质。琼脂糖是一种聚合链线性分子;聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺(Acr)在 N,N,N′-四甲基乙二an(TEMED)和过硫酸胺(AP)的催化下聚合形成长链,并通过交联剂 N,N′-亚甲双丙烯酰胺(Bis)交叉连接而成。琼脂糖凝胶适合分离200bp至近50kb的DNA片段,而聚丙烯酰胺凝胶对于小片段(5bp-500bp)的分离效果很好,且分辩力极高。选择不同浓度的凝胶,可以分离不同大小范围的 DNA 分子。电场强度愈大,带电颗粒的运动越快。但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小,所以电泳时一般采用低电压,不超过 6V/cm。而对于大片段电泳,可以选择 0.5-1.0V/cm 电泳过夜。如果选择高电压电泳,可使用聚丙烯酰胺凝胶。
  1. 凝胶强度:衡量琼脂糖性能的关键参数,凝胶强度越高,凝胶性能越好,可以保证在低浓度下,凝胶性能依然很好,高凝胶强度琼脂糖适合大分子核酸。
  2. 低电渗(Low EEO):电渗是一种物理现象,由于琼脂糖这样的多孔支持物在电场中会吸附水中的正负离子,而使溶液带电向电极泳动,从而干扰核酸或蛋白电泳。
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