琼脂糖是用于什么样的实验你了解吗？
更新时间：2020-03-18 点击次数：694次
琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物，以琼脂凝胶作为支持物，利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下，忽略DNA分子携带的电荷，DNA 分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA 分子的迁移速度与相对分子量成反比。
不同构型的 DNA 分子的迁移速度不同。如环形 DNA 分子样品，其中有三种构型的分子：超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形 DNA 分子(IDNA)。这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA。
核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质。琼脂糖是一种聚合链线性分子；聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺（Acr）在 N,N,N′-四甲基乙二an（TEMED）和过硫酸胺（AP）的催化下聚合形成长链，并通过交联剂 N,N′-亚甲双丙烯酰胺（Bis）交叉连接而成。琼脂糖凝胶适合分离200bp至近50kb的DNA片段，而聚丙烯酰胺凝胶对于小片段（5bp-500bp）的分离效果很好，且分辩力*。选择不同浓度的凝胶，可以分离不同大小范围的 DNA 分子。电场强度愈大，带电颗粒的运动越快。但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小，所以电泳时一般采用低电压，不超过 6V/cm。而对于大片段电泳，可以选择 0.5-1.0V/cm 电泳过夜。如果选择高电压电泳，可使用聚丙烯酰胺凝胶。
1. 凝胶强度：衡量琼脂糖性能的关键参数，凝胶强度越高，凝胶性能越好，可以保证在低浓度下，凝胶性能依然很好，高凝胶强度琼脂糖适合大分子核酸。
2. 低电渗（Low EEO）：电渗是一种物理现象，由于琼脂糖这样的多孔支持物在电场中会吸附水中的正负离子，而使溶液带电向电极泳动，从而干扰核酸或蛋白电泳。
