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Zeta Life 转染试剂解决RAW264.7细胞转染效率低的问题
发布时间:2020-03-26   点击次数:342次

RAW264.7细胞转染效率低怎样提高转染效率一直是困扰实验者的一道难题,特别对于比较大的质粒DNA的转染更是困难;我们实验室用美国Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂货号AD600150转染raw 264.7细胞整理了一套优化方案希望对大家转染raw 264.7细胞提高转染效率有一定的帮助。

下图是用美国Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂货号AD600150在6孔板转染8000bp左右的pEGFP-C1r到RAW264.7细胞的荧光和细胞明场图片。

 

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提高转染raw 264.7细胞条件如下

一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素),我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素

二、操作流程

1、先将细胞接种到细胞培养板,细胞汇合度在70%左右,再进行转染。

2、复合物制备:将质粒DNA与Zeta Life公司Advanced DNA RNA货号AD600150转染试剂按照1:1(12ug:12ul)关系直接混合,用移液器吹吸10-15次混匀,室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板,并轻轻混匀,放入培养箱中继续培养(不建议把复合物加入到无血清的培养基里面,我后期会进一步摸索此条件)。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

三、注意事项:

1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如:lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等;

2细胞培养Zeta Life z7181-500胎牛血清,Gibco的DMEM;

四、美国Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂信息:

产品名称

货号

规格

数量

报价

Advanced  DNA RNA  转染试剂

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced  DNA RNA  转染试剂

AD600050

0.5

1

2390

Advanced  DNA RNA  转染试剂

AD600075

0.75

1

2890

Advanced  DNA RNA  转染试剂

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced  DNA RNA  转染试剂

AD600500

5ML

1

电询

Advanced  DNA RNA  转染试剂

AD601000

10ML

1

电询

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