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Zeta Life 转染试剂转染raw 264.7细胞如何提高转染效率
发布时间:2020-03-26   点击次数:174次

用试剂转染raw 264.7细胞怎样提高转染效率一直是困扰实验者的一道难题,特别对于10000左右质粒DNA的转染更是困难;我们实验室总结了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA转染试剂货号AD600025转染raw 264.7细胞一套优化方案希望对大家转染raw 264.7细胞提高转染效率有一定的帮助。

下图是8000bp左右的pEGFP-C1在6孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂转染raw 264.7细胞的荧光和细胞明场图片。

 

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提高转染raw 264.7细胞条件如下

一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素),我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素

二、操作流程

1、先将细胞接种到细胞培养板,细胞汇合度在70%左右,再进行转染。

2、复合物制备:将质粒DNA与Zeta Life Advanced Transfection Reagent货号AD600025转染试剂按照1:1(12ug:12ul)关系直接混合,用移液器吹吸10-15次混匀,室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板,并轻轻混匀,放入培养箱中继续培养(不建议把复合物加入到无血清的培养基里面,我后期会进一步摸索此条件)。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

三、注意事项:

1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如:lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等;

2细胞培养基:Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,Gibco公司DMEM;

四、美国Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂信息:

产品名称

货号

规格

数量

报价

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600050

0.5

1

2390

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600075

0.75

1

2890

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600500

5ML

1

电询

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD601000

10ML

1

电询

五、RAW 264.7细胞简述:

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞. 此细胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。 sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。 可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。 可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。

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