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Zeta Life公司转染试剂转染raw 264.7细胞经验分享
发布时间:2020-03-26   点击次数:206次

为了转染raw 264.7小鼠巨噬单核细胞我们实验室尝试了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它转染试剂,对于我们8000bp的质粒DNA基本转染后都没有荧光信号;师兄在中山大学的同学给我们推荐了他们实验室用Zeta Life Advanced DNA RNA货号AD600050转染raw 264.7细胞经验分享。

按照中山大学师兄给出的方法并结合我实验室情况我把自己在6孔板转染raw 264.7细胞的相关经验整理如下,希望对你转染raw 264.7细胞有一定的帮助,下面是我首次用转染raw 264.7细胞的荧光和细胞明场图片,后期进一步优化后的新图片我也会随后呈上:

 

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一、质粒DNA准备

1、质粒DNA浓度700ng/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素),我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素

二、操作流程

1、先将细胞接种到细胞培养板,细胞汇合度在70%左右,再进行转染。

2、复合物制备:将质粒DNA与Zeta Life Advanced Transfection Reagent货号AD600050转染试剂按照1:1(12ug:12ul)关系直接混合,用移液器吹吸10-15次混匀,室温静止10-15分钟。

3、将复合物加入完全培养基的细胞培养板,并轻轻混匀,放入培养箱中继续培养(不建议把复合物加入到无血清的培养基里面,我后期会进一步摸索此条件)。

4、转染24小时后对细胞进行正常换液。

5、质粒DNA转染48小时后荧光检测转染效率

三、Zeta Life Advanced DNA RNA转染试剂信息:

产品名称

货号

规格

数量

报价

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600050

0.5

1

2390

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600075

0.75

1

2890

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD600500

5ML

1

电询

Advanced DNA RNA 转染试剂

AD601000

10ML

1

电询

四、注意事项:

1本转染方法不适用在下面转染试剂的转染如:lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等转染试剂;

2细胞培养基:Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,Gibco公司DMEM;

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