293无血清培养基使用之细胞复苏方法

　　293无血清培养基使用之细胞复苏，小编为您介绍细胞复苏的流程：

　　1）迅速取出冻存的细胞，在37℃水浴条件下进行解冻（可以在水中轻轻晃动，时间控制在60s以内）；

　　2）轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至15ml无菌离心管中，逐滴加入10ml预热到37℃的培养基，离心换液（100g，5min）去除全部上清，加入新鲜培养基重悬，使得细胞密度达到0.4-0.66cells/ml；

　　3）将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175rpm的恒温摇床中进行培养；

　　4）2-4天后通过人工或仪器测定细胞的密度及活率，如果细胞密度达到1.0*106cells/ml，活率达到85%以上则可进行传代培养；

　　5）如果细胞密度低于1.0*106cells/ml，则建议对细胞进行离心（100g，5min），然后重悬于20-30ml的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6*106cells/ml左右，并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。

　　293无血清培养基描述：

　　Balance CD 293 培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞（如293-F,293-T, Expi-293F等）的高密度生长和瞬时转染表达。 Balance CD 293 培养基含有细胞生长所需的全部营养成份，无需添加任何添加物即可使用。（注意：此培养基不包含抗生素以及血清）

　　293无血清培养基特点:

　　瞬时转染专用培养基，适用于HEK293细胞高密度悬浮培养

　　无蛋白、无动物源、化学成分限定

　　即用型*培养基,无需添加额外成分

　　以上为293无血清培养基使用之细胞复苏的方法，如需了解更多请联系创凌生物！

　　产品使用方法：

　　细胞驯化

　　1）直接驯化

　　大部分情况下，培养于其他培养基中的细胞，可以直接适应Balance CD 293 medium，只要按照日常传代方式（稀释）更换培养基即可。

　　2）渐进式驯化

　　注意：选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化

　　①在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代2到3次至细胞生长稳定，当细胞密度达到2x10 6 cells/ml后进行传代，传代细胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25；

　　②将细胞置于37℃，5% CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养；

　　③当细胞密度3-4天后达到3x10 6 cells/ml且细胞活率>90%，传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50，细胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如细胞生长慢，可离心上清，留20%条件培养基，加入80%的5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基，继续培养；

　　④重复步骤③逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培养基；

　　⑤经过在100%的 Balance CD 293 培养基中的几次传代培养，传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×10 6  cells/mL，细胞活率大于90%，这说明细胞已经*适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL，一般传代2-3次后再进行转染实验。

　　注意: 一般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但一般从第四代状态会有改善。

　　细胞传代

　　1）取细胞培养样品，人工或仪器测定细胞密度以及活率；

　　2）计算传代所需的细胞用量，建议起始细胞密度为0.2-0.4×10 6 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL（100 mL的培养瓶）或50-60 mL（250 mL 的培养瓶）；

　　3）将细胞置于37℃，5%CO2，转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养，3-4天传代一次。

　　细胞转染在Balance CD 293培养基中，采用商业化转染试剂（例如 Gibco 293Fectin?ExpiFectamine? 293 Transfection Kit ）或 PEI 可以实现对 HEK293 细胞的高效转染。