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Thp-1细胞高效率转染条件分享
发布时间:2021-08-25   点击次数:116次

Thp-1细胞高效率转染条件分享

 

转染材料准备:

1、转染试剂用量10ul

2siRNA浓度:20um/L

3、细胞密度:1*106-1*105

4、转染用培养板:6孔板

5、转染试剂:Advanced DNA RNA转染试剂;货号:AD600025

6、转染时间:48小时

7、细胞培养胎牛血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清

8、细胞冻存液:L0100无血清细胞冻存液
注意:本细胞转染用量条件不适合lipo使用。

THP1.png

 

 

操作过程:

1.提前1接种细胞细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染

2. 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合用移液器吹打、混匀,室温静止15分钟。

3.在细胞培养基加入核酸复合物根据参考用量在细胞中加入核酸复合物并轻轻混匀细胞培养基里面可以含有血清。

4.细胞换液:转染24小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。

5.分析结果质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率,48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率,48-72小时检测mRNA或蛋白表达。

二、转染试剂产品介绍

Zeta Life 公司与美国加利福尼亚大学旧金山校区联合开发用于哺乳动物细胞、活体动物转染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子转染试剂,此技术成为新的全球蛋白功能、免疫细胞及干细胞治疗、研发及生产的主要关键技术之一。

三、优秀表现

Zeta Life多肽小分子转染试剂尺寸大小是传统脂质体转染试剂体积的1/10;

本转染试剂是通过细胞内㖔和细胞主动吸收进入细胞;

本转染试剂进入后对细胞膜无物理性损伤,不易出现细胞变形,保持高的细胞活力;

不激活细胞表面或细胞体内marker;

可反映真实的细胞通路蛋白原始数据;

可转染免疫细胞、悬浮细胞等;

 

 

 


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