U937细胞效率转染条件分享

转染材料准备

1、转染试剂用量：10ul

2、DNA/siRNA浓度：电讯

3、细胞密度：1*106-1*105

4、转染用培养板：6孔板

5、转染试剂：AD600025 Advanced DNA RNA转染试剂

6、转染时间：15小时

7、细胞培养胎牛血清：Z7181FBS-500胎牛血清

8、细胞冻存液：L0100无血清细胞冻存液

操作过程：

1.提前1天接种细胞：细胞汇合度在60-80%左右，再进行转染。

2. 核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合，用移液器吹打、混匀，室温静止15分钟。

3.在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基里面可以含有血清。

4.细胞换液：转染24小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。

5.分析结果：质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达。