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293细胞无血清悬浮培养基产品使用方法
发布时间:2021-11-23   点击次数:413次

293细胞无血清悬浮培养基产品使用方法

产品描述

Balance CD 293 培养基适用于悬浮培养条件下的HEK293细胞(如293-F,293-T, Expi-293F

等)的高密度生长和瞬时转染表达。 Balance CD 293 培养基含有细胞生长所需的全部营养成

份,无需添加任何添加物即可使用。(注意:此培养基不包含抗生素以及血清)

 

产品特点

􀂾 瞬时转染专用培养基,适用于HEK293细胞高密度悬浮培养

􀂾 无蛋白、无动物源、化学成分限定

􀂾 即用型完全培养基,无需添加额外成分

基础参数

外观:澄清透明红色液体

渗透压:275±15 mOSM

pH:6.9-7.4

无菌检测:无菌

内毒素: <5 EU/mL

储存条件:2-8℃,避光

效期:12个月

产品用途:仅用于科学研究,不适用于人类或动物的诊断和治疗

产品使用方法

细胞驯化

1)直接驯化

大部分情况下,培养于其他培养基中的细胞,可以直接适应Balance CD 293 medium,只要

按照日常传代方式(稀释)更换培养基即可。

2)渐进式驯化

注意:选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化

在原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代23次至细胞生长稳定,当细胞密度达到2x106 cells/ml后进行传代,传代细胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为75:25

将细胞置于37℃5% CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养;

当细胞密度3-4天后达到3x106 cells/ml且细胞活率>90%,传代时5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293培养基的比例为50:50,细胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如细胞生长慢,可离心上清,留20%条件培养基,加入80%5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基比例为75:25的混合培养基,继续培养;

重复步骤逐步增加Balance CD 293培养基所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与Balance CD 293 培养基的比例为25:7510:90)直到100%Balance CD 293培养基;

经过在100% Balance CD 293 培养基中的几次传代培养,传代后3-4天细胞的密度可以达到2-3×106 cells/mL,细胞活率大于90%,这说明细胞已经完全适应了Balance CD 293 培养基。之后进行细胞的传代培养时,细胞的起始密度可以降到0.3×106 cells/mL,一般传代2-3次后再进行转染实验。

注意: 一般细胞驯化过程中,前三代细胞的状态可能不是很好,但一般从第四代开始状态会有改善

细胞传代

1)取细胞培养样品,人工或仪器测定细胞密度以及活率;

2)计算传代所需的细胞用量,建议起始细胞密度为0.2-0.4×106 cells/mL。建议复苏的细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为15-20 mL100 mL的培养瓶)或50-60 mL250 mL 的培养瓶);

3)将细胞置于37℃5%CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养,3-4天传代一次。

细胞转染在Balance CD 293培养基中,采用商业化转染试剂(例如 Gibco 293Fectin™

ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )或 PEI 可以实现对 HEK293 细胞的高效转染。

细胞复苏

1)迅速取出冻存的细胞,在37℃水浴条件下进行解冻(可以在水中轻轻晃动,时间控制在60s以内);

2)轻轻地混匀细胞并将融化的细胞全部移至15mL无菌离心管中,逐滴加入10 mL预热到37℃的培养基,离心换液(100 g5 min)去除全部上清,加入新鲜培养基重悬,使得细胞密度达

0.4-0.6×106 cells/mL

3)将细胞置于37℃5%CO2,转速为110-175 rpm的恒温摇床中进行培养;

42-4天后通过人工或仪器测定细胞的密度以及活率,如果细胞密度达到1.0×106 cells/mL,活率达到85%以上则可进行传代培养;

5)如果细胞密度低于1.0×106 cells/mL,则建议对细胞进行离心(100 g5 min),然后重悬于20-30 mL 的新鲜培养基中使得细胞密度为0.4-0.6×106 cells/mL 左右,并继续培养至细胞正常生长则可进行传代培养。

细胞冻存

1)冻存细胞时,要选择处于对数生长期同时细胞活率在90%以上的 HEK293 cells

2)事先计算好冻存的细胞管数和所用的培养基的体积;

3)制备细胞冻存液:46.25% 的新鲜Balance CD 293培养基+46.25% 条件Balance CD 293 培养基,混合之后再加入7.5% DMSO,存放在4℃,一般为当天用当天制备;

4)对细胞样品进行计数;

5)取样计数,以100 g3-5 min的条件离心收集细胞,然后用冻存培养基( 4℃ )重悬细胞,使得细胞密度为 5-10×106 cells/mL

6)取样计数,调整细胞密度;迅速分装细胞到无菌的冻存管中,一般2 mL 的冻存管放1-1.5 mL,贴好标签,密封;

7)将细胞冻存管放到程序降温冻存盒(注意填充异丙醇,4℃预冷)中,置于-80℃ 冰箱(每分钟下降1℃),过夜存放后将细胞转入液氮罐中进行保存。


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