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Advanced DNA RNA 转染RAW264.7细胞的操作步骤
发布时间:2022-03-07   点击次数:104次

一.RAW264.7细胞

细胞取材于Abelson小鼠白血病病毒诱发的肿瘤组织,是科研上尤为常用的炎症细胞模型之一。该细胞易于增殖,有高效DNA转染力,对RNA干扰敏感,常用作转染宿主细胞和复制小鼠诺如病毒。细胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原阴性。据报道,该细胞建系后已不分泌且检测不到病毒颗粒,XC斑点形成实验阴性。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞,LPS或PPD处理2天后可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。

二、产品说明

1、产品名称

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包装规格

货号:AD600150

规格:1.5ml

3、储存条件

常温运输,4℃保存,可保存两年,拒绝反复冻融。

三、产品应用

各种细胞类型中最高的转染效率。

可用于多种真核细胞系的DNA转染、siRNA转染和共转染;

可用于各种原代细胞的DNA转染、siRNA转染;

可转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞,如:T细胞、NK细胞、人淋巴细胞、THP-1等;

可高效率转染siRNA到任何哺乳动物细胞。

四、使用说明

1、材料准备

RNA 浓度 20 uM /L

质粒 DNA 浓度 300 ng-2 ug/ul(注意:①溶解于无菌双蒸水或超纯水;②无内毒素 )

2、操作步骤

提前 1 天接种细胞:细胞汇合度在 60-80%左右,再进行转染。

核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混匀,室温静 止 10-15 分钟。

在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基 里面可以含有血清。

细胞换液:转染 24 小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。

分析结果:质粒 DNA 转染 48-72 小时后荧光检测转染效率,48-96 小时检测 mRNA 或蛋白表达。若 进行稳定表达细胞株的筛选,则在转染后 24-48 小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA 转染后 9 小时荧光检测转染效率,48-72 小时检测 mRNA 或蛋白表达。


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