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蛋白定量-iTRAQ&TMT同位素标记定量介绍
发布时间:2022-08-09   点击次数:62次


同位素标记定量

iTRAQ(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)&TMT(Tandem Mass Tags)分别由AB Sciex公司和Thermo公司研发的多肽体外标记定量技术,利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或者赖氨酸侧链基团,不同分子量的试剂对不同来源的样品进行标记从而实现不同样品间蛋白质组的比较。

iTRAQ/TMT试剂由三部分组成:报告基团、平衡基团和反应基团。反应基团形成2-10种等质量同位素标签。iTRAQ/TMT试剂标记酶解后的肽段,可与氨基酸N端及侧链的伯胺基团发生反应。在一级谱图中,来自于不同样本的同一肽段,标记后表现为相同的质荷比。在二级谱图中,报告基团、平衡基团和反应基团之间的键断裂,带不同同位素标签的同一肽段产生质量不同的报告离子,根据报告离子的丰度可获得样本间相同肽段的定量信息,再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。

iTRAQ实验步骤

1. 样品制备

2. 酶解消化

3. iTRAQ标记:

4. 样本混合/肽段分级

5. 数据处理及生信分析

结果展示

火山图

实验周期及交付标准

1. 实验周期:6周左右

2. 交付标准:蛋白定量结果、鉴定结果、质谱原始数据、生信分析结果(GO分析、KEGG分析等等)

需确认的信息

1. 样本的种属

2. 样本的类型(组织or细胞or血液)

3. 样本的数量及分组

4. 分析要求


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