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细胞周期检测实验介绍
发布时间:2022-08-17   点击次数:68次


技术原理

细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期:即DNA合成期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期,停止细胞分裂,执行一定生物学功能(G0期)。由于细胞周期各时相的DNA含量不同,通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。 PI可以与DNA结合,其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此,通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期。

PI为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。

实验方法

Step1:细胞培养

Step2:转染或药物处理

Step3:细胞收集

Step4:加周期试剂

Step5:上机检测

案例展示

在施加药物后,细胞周期明显阻滞。

技术总结

1、考虑到进行流式时需要用到对照组细胞设置空白组(用于调节电压)和单染组细胞(用于调节补偿),因此要求该组细胞量较其他组多;

2、如发现细胞密度偏低,细胞量较少,则适当增加离心时间。收集细胞时,应该连同上清一起收集,同时胰酶消化时间不宜过长,否则容易引起假阳性;

3、检测细胞经过转染等处理后可能会带有自发荧光,应注意选择试剂盒的颜色通道 如:带绿色荧光时,应选择红光试剂盒;

4、细胞铺板应选择细胞状态良好的时候进行,且避免因反复吹打形成机械损伤,而出现细胞碎片过多。

送检与交付标准


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