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ColProof细胞和组织DNA快速提取试剂盒产品应用介绍
更新时间:2023-03-22   点击次数:416次

试剂盒应用


本试剂盒针对哺乳动物细胞、组织开发的专用裂解液DC,在10 分钟内完成细胞和组织的裂解、提

取和纯化。使用高效硅基DNA 纯化柱,高效结合基因组DNA,从而获得纯度高,产量高的基因组

DNA。提取的基因组DNA 完整性高,适合PCR、qPCR、酶切、Southern 杂交、文库构建、克隆等。

本试剂盒仅供研究使用,不可用于临床、食品、化妆品等领域。

试剂盒组成

保存条件

室温保存一年。

自备材料

无水乙醇、无DNase 和无RNase 离心管、RNaseA(10mg/mL,或货号QR0101)

使用方法

1. 样本处理

1.1 从动物组织中提取DNA

1.1.1 取20-100mg 样本放入液氮中充分研磨,加入700μL 裂解液DC,充分混匀,室温作用1 分钟。

或取20-100mg 样本加入700μL 裂解液DC,加入1 颗钢珠,放入组织研磨器中,研磨1-2 分钟。

1.1.2 (选做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室温静置5-10 分钟。

1.1.3 加入350μL 无水乙醇,充分混匀,12,000rpm 离心1 分钟。

1.1.4 取700μL 上清加到DNA 纯化柱中,按照步骤2.1-2.7 操作。

1.2 从悬浮细胞中提取DNA

1.2.1 细胞1,000rpm 离心5 分钟,收集细胞沉淀。

1.2.2 细胞数量<5×106 个时,加入500μL 裂解液DC。细胞数量为5×106~1×107 个时,加入700μL 裂

解液DC。轻轻吹打混匀,室温放置1 分钟。

1.2.3 (选做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室温静置5-10 分钟。

1.2.4 加入0.5 倍体积的无水乙醇,上下颠倒混匀。

1.2.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中,按照步骤2.1-2.7 操作。

1.3 从贴壁细胞中提取DNA

1.3.1 胰酶消化细胞后1,000rpm 离心5 分钟,收集细胞沉淀。

1.3.2 细胞数量<5×106 个时,加入500μL 裂解液DC。细胞数量为5×106~1×107 个时,加入700μL 裂

解液C。轻轻吹打混匀,室温放置1 分钟。

1.3.3 (选做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室温静置5-10 分钟。

1.3.4 加入0.5 倍体积的无水乙醇,上下颠倒混匀。

1.3.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中,按照步骤2.1-2.7 操作。

2. DNA 纯化

2.1 12,000rpm 离心30 秒,倒掉收集管中废液。

2.2 向吸附柱中加入500μL 洗涤液DCW1,12,000rpm 离心1 分钟,倒掉收集管中废液。

2.3 向吸附柱中加入500μL 洗涤液DCW2,12,000rpm 离心30 秒,倒掉收集管中废液。

2.4 重复步骤2.3 一次。

2.5 12,000rpm 离心2 分钟,倒掉收集管中废液。

2.6 将吸附柱放入新无DNase 和无RNase 离心管,加入30-50μL 洗脱液C,室温放置1 分钟。

2.7 12,000rpm 离心2 分钟,得到DNA 溶液,-80℃保存。

注意事项

1. 经常更换手套,防止DNA 污染。

2. 使用无DNase 无RNase 的吸头和离心管,防止DNA 降解。

3. 常更换吸头,防止交叉污染。

4. 动作轻柔,防止基因组DNA 断裂。

5. 为了提高洗脱效率,可提前将洗脱液C 置于65℃水浴后再使用。



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