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美国Azaood公司All-in-One RT SuperMix for qPCR AZ00003产品介绍
更新时间:2023-11-10   点击次数:282次

货号:AZ00003

储运条件

-20℃

产品组成

产品简介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款便捷、减少污染的高质量一链cDNA 合成试剂盒,包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反应Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链cDNA 合成所需的所有组分,仅需加入RNA 模板和水即可开始反应。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作为升后的一链cDNA 合成试剂盒,15 分钟内长可获得12 kb cDNA,产物可用于qPCR、普通PCR 等实验。从组织或细胞中提取的RNA 往往残留基因组DNA 污染,如果反转录不做去除处理,下游进行qPCR 反应时基因组DNA 与cDNA会同时进行扩增,尤其是引物设计在同一外显子上时,影响定量准确性。本试剂盒所采用的dsDNase 能够特异性消化双链DNA 或DNARNA杂合双链中的DNA,并且具有热敏感性,在逆转录反应温度下即可快速不可逆地失活。与传统使DNase I 去除基因组DNA 污染的方法相比,dsDNase 无需额外加入EDTA 进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。可依据基因组DNA 污染严重程度,选择去基因组DNA 污染与反转录分开进行,或者去基因组DNA 污染与反转录一步进行的操作方法。

使用方法

针对基因组DNA 含量低的RNA 样品(推荐方案)

① 于冰上配制如下反应体系:

a. 推荐使用试剂盒提取的高质量RNA 作为模板。

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 37℃温育2 min,以去除基因组DNA 污染;

④ 55℃温育15 min;

⑤ 反应结束后,85℃温育2 min 以终止反应;

⑥ 迅速将获得的cDNA 置于冰上,用于后续实验;或立即保存于-20℃。

针对基因组DNA 含量高RNA 样品

1. 基因组DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反应体系:

a. 推荐采用试剂盒提取的RNA 作为模板。

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 37℃温育2 min,以去除基因组DNA 污染;

注:若RNA 中基因组DNA 污染严重,可适当延长37℃温育时间至5 min。

④ 65℃温育2 min,使dsDNase 失活,然后置于冰上。

2. diyi链cDNA 合成

① 于冰上配制如下反应体系:

② 轻柔吸打混匀,瞬离;

③ 50℃温育15 min;

注:若目标RNA 不含Poly(A) 结构,可预先25℃温育10 min。

④ 反应结束后,85℃温育2 min,以终止反应;

⑤ 将获得的cDNA 溶液置于冰上,用于后续实验。

注:cDNA 溶液置于-20℃储存,建议不超过1 周;置于-80℃可储存。

注意事项

预混液中已经包含Oligo(dT)20VN 和随机引物,不仅适用于包含Poly(A) 结构的真核生物mRNA,也适用于不含Poly(A) 结构的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,但不适用于miRNA 等小RNA 模板。

美国Azaood公司成立于2004年,是一家开发和生产用于生命科学研究、诊断和生物技术应用的高质量纯化酶、蛋白质、核酸和细胞分离试剂盒、胎牛血清的行业导者;Azood公司是通过了ISO9001认证的主要制造商,可以满足从研究到大规模批量生物加工和OEM应用与要求的公司。


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