技术文章您的位置:网站首页 >技术文章 > Azaood产品介绍Universal SYBR Green qPCR Mix REF AZ00007产品介绍
Azaood产品介绍Universal SYBR Green qPCR Mix REF AZ00007产品介绍
更新时间:2023-11-10   点击次数:496次

货号: AZ00007

储运条件

保存请于-20℃避光保存,Mix 融解后可在4℃避光条件下稳定存放一个月,尽量避免反复冻融。

产品组分

产品简介

Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR® Green I 嵌合染料法用qPCR 试剂,为2× 预混液,包含除引物和DNA 样品以外的所有qPCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA 聚合酶,配合精心优化的Buffer 体系以及PCR 反应促进因子,使产品具有特异性强、扩增效率高等特点,有效抑制非特异性扩增,可对宽广浓度范围的模板进行准确定量,获得稳定可靠的qPCR 结果。预混液中含有通用校正染料,与绝大多数 qPCR 设备兼容,包括需要 ROX 校正的仪器,实验过程中一般不需要额外添加校正染料。

使用方法

1. 使用注意

① 因Mix 中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;

② 使用上下颠倒轻轻混匀Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡;

③ Mix 中含有Universal 校正染料,适用于所有机型,无需额外添加染料。

2. 建议的qPCR 反应体系

a. 通常推荐的引物终浓度为0.2 μM,反应效果不佳时可在0.1~1 μM 范围内进行调整;

b. 推荐模板加样量为1~2 μl,如模板类型为未稀释cDNA 原液,模板添加量不应超过总反应体系的10%。不同种类DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同,必要时可进行梯度稀释,以确定佳的DNA 模板添加量。

3. qPCR 反应程序(可根据机型适当调整)

两步法

三步法

a. 根据引物的Tm 值进行退火& 延伸(退火)温度的设定;若扩增片段在200bp 以内,退火& 延伸(延伸)时间可以设置为15 sec;此外,退火& 延伸(延伸)时间的设置还需根据您使用的qPCR 仪所需要的短数据采集时间自行调整;

b. 不同qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别,一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。

4. 实验优化

若使用默认反应条件反应性能不佳时,则需要进行反应条件的优化,可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行:

① 引物浓度调整

当引物终浓度在0.1~1.0 μM 范围之间变化时,引物浓度越低,扩增特异性越高,但扩增效率会有所下降。

② 扩增程序优化

需提高扩增特异性,可使用两步法程序或提高退火温度;需提高扩增效率,可使用三步法程序或延长延伸时间。

5. 引物设计原则

① 扩增产物长度建议控制在80~200 bp;

② 引物长度为18~25 bp;

③ 正向引物和反向引物的Tm 值相差不超过1℃为佳,Tm 值控制在58~62℃为佳;

④ 引物的GC 含量控制在40%~60% 之间;

⑤ 引物A、G、C、T 整体分布尽量要均匀,避开T/C 或者A/G 的连续结构(特别是3' 端);

⑥ 引物3' 端后一个碱基好为G 或者C;

⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列;

⑧ 使用NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。

美国Azaood公司成立于2004年,是一家开发和生产用于生命科学研究、诊断和生物技术应用的高质量纯化酶、蛋白质、核酸和细胞分离试剂盒、胎牛血清的行业导者;Azood公司是通过了ISO9001认证的主要制造商,可以满足从研究到大规模批量生物加工和OEM应用与要求的公司。


©2024  上海创凌生物科技有限公司 All Rights Reserved.  网站地图  沪ICP备2023009255号-1  管理登陆  技术支持:化工仪器网
在线客服 二维码

扫一扫,关注我们