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流式细胞仪检测A172细胞凋亡的实验报告实验报告书
发布时间:2019-12-09   点击次数:157次

式细胞仪检测A172细胞凋亡的实验报告实验报告书 

一、 实验仪器与试剂 

表格一:实验仪器 

仪器 

厂家 

型号 

细胞培养箱 

Thermo Scientific

HERA cell CO2

低温高速离心机 

64R

BECKMAN  

流式细胞仪 

BD

FACS Calibur

 

表格二:试剂 

试剂 

厂家 

DMEM 培养液 

Hyclone

胎牛血清 

Gibco

无钙、镁 PBS 7.4 (0.1 M)

自配 

Annexin V-FITC/PI 凋亡检测试剂盒 

BD

二、 实验步骤 

细胞培养 取对数生长期的 A172 细胞,按 1*105/mL  1mL 体积接种于 6 孔板内。无抗生素培养液培养过夜,到转染时使细胞达到 70%的汇合率。 

转染 

 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM ,混合均匀。 

 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 无血清的 DMEM 中,混合均

匀。在室温下孵育 5 分钟。 

将上述两种混合物混合(总体积 800uL,轻轻混合均匀在室温下孵育

20 分钟形成复合物。 

 6 孔板中每孔加入 800uL 复合物。十字法混合均匀。 

细胞在 375%CO2培养箱中培养 6h 后弃上清液,并加入 10%胎牛血

清的 DMEM 培养液。 

染色 消化并离心收集细胞(1000rpm/min)后弃上清,加入无钙、镁 PBS 1mL

2 次,离心后弃上清。分别加入 100μL binding buffer5μL Annexin V-FITC  5μL

PI 溶液,室温避光孵育 15min 

4. 检测 

加入 400μL binding buffer 后以标准程序用流式细胞仪检测,汞激发波长

488nm,计数 1 万个细胞。 

三、 实验结果 

省略 

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